积雪草对转染TGF-β1基因的大鼠肾小球系膜细胞Smad 2/3、Smad 7和胶原蛋白Ⅳ表达的影响

doi:10.12047/j.cjap.5568.2018.030

中国应用生理学杂志 ›› 2018, Vol. 34 ›› Issue (2): 122-125.doi: 10.12047/j.cjap.5568.2018.030

积雪草对转染TGF-β1基因的大鼠肾小球系膜细胞Smad 2/3、Smad 7和胶原蛋白Ⅳ表达的影响

马继伟¹, 王宏天¹, 刘浩飞¹, 董磊鹏¹, 丁元², 白继琼³, 张翥¹, 东莉洁⁴

1. 河南中医药大学第一附属医院, 郑州 450000;
2. 信阳市中心医院, 河南信阳 464000;
3. 巩义市人民医院, 河南巩义 451200;
4. 天津医科大学眼科医院, 眼科研究所, 天津 300384

收稿日期:2017-06-23 修回日期:2017-10-30 出版日期:2018-03-28 发布日期:2018-05-22
通讯作者: 马继伟 E-mail:jiwei193074@126.com
基金资助:
国家自然科学基金支持项目（81570872）；天津市应用基础与前沿技术研究计划一般项目（15JCYBJC24900）

Effects of centellaasiatica granule on the expression of Smad 2/3, Smad 7 and collagen Ⅳ in the mesangial cells stably expressed TGF-β1

MA Ji-wei¹, WANG Hong-tian¹, LIU Hao-fei¹, DONG Lei-peng¹, DING Yuan², BAI Ji-qiong³, ZHANG Zhu¹, DONG Li-jie⁴

1. Department of Nephrology, Henan University of Traditional Chinese Medicine Affiliated First Hospital, Zhengzhou 450000;
2. Xinyang Central Hospital, Xinyang 464000;
3. Gongyi City People's Hospital, Gongyi 451200;
4. Tianjin Medical University Eye Hospital, Eye Institute, Tianjin 300384, China

Received:2017-06-23 Revised:2017-10-30 Online:2018-03-28 Published:2018-05-22
Supported by:
国家自然科学基金支持项目（81570872）；天津市应用基础与前沿技术研究计划一般项目（15JCYBJC24900）

摘要/Abstract

摘要： 目的：通过细胞转基因技术，获得稳定表达转化生长因子β1（TGF-β1）的系膜细胞（MC）克隆，观察积雪草（CA）对Smad 2/3、Smad 7和胶原蛋白1V表达及Smad 2/3磷酸化的影响。方法：采用脂质体的方法将TGF-β1表达质粒转入MC细胞，采用G418筛选并建立稳定表达TGF-β1的细胞株。将MC细胞株分为3组：对照组（未转染TGFβ1的MC+RPMI 1640+10%正常大鼠血清），TGF-β1转染组（稳定表达TGF-β1的MC+RPMI 1640+10%正常大鼠血清），积雪草（CA）组：稳定表达TGF-β1的MC+RPMI 1640+10%含高浓度CA的大鼠血清。实验重复5次。ELISA法检测各组培养上清中TGF-β1和胶原Ⅳ的含量；RT-PCR方法检测各组细胞TGF-β1、Smad 2/3、Smad 7的mRNA表达水平；Western印迹法检测各组细胞TGF-β1、Smad 2/3、p-Smad 2/3、Smad 7、胶原Ⅳ的蛋白质水平。结果：TGF-β1转染组细胞上清液中的TGF-β1和胶原蛋白Ⅳ水平显著升高，积雪草能显著降低TGF-β1和胶原蛋白Ⅳ水平；TGF-β1转染组细胞中TGF-β1、Smad 2/3的mRNA和蛋白质表达水平及Smad 2/3的磷酸化水平均显著升高，而CA可显著降低MC细胞中TGF-β1、Smad 2/3的mRNA和蛋白质表达水平及Smad 2/3的磷酸化水平；TGF-β1转染组细胞中的Smad 7 mRNA水平显著降低，而CA能使Smad 7的mRNA水平显著升高。结论：稳定表达TGF-β1的MC细胞能激活TGFβ1/Smad信号通路，并引起胶原蛋白Ⅳ表达增加，而CA通过抑制此通路的激活，进而抑制胶原蛋白Ⅳ的表达而减缓糖尿病肾病（DN）的发生。

关键词: 大鼠, 糖尿病肾病, 积雪草, 转化生长因子-β1, Smad信号通路, 胶原蛋白Ⅳ

Abstract: Objective:Stably expressed transforming growth factor -beta 1(TGF-β1)MCs were obtained and the effects of centellaasiatica (CA) granule on the expressions of Smad 2/3, Smad 7 and collagen Ⅳ and the level of Smad 2/3 phosphorylation were observed. Methods:Lipofectin method was used to transfect TGF-β1 vector into MC, and the stably expressed TGF-β1 cell lines were selected by G418. The cells were divided into three groups. Control group:normal MC + RPMI 1640 + 10% normal rat serum; TGF-β1 group:stably expressed TGF-β1 MC + RPMI 1640 + 10% normal rat serum; CA group:stably expressed TGF-β1 MC + RPMI 1640 + 10% rat serum containing high CA. The experiments were repeated for five times. The contents of TGF-β1 and collagen Ⅳ in the culture medium were detected with ELISA, the expressions of mRNA and protein of TGF-β1, Smad 2/3, Smad 7 and the level of Smad 2/3 phosphorylation were detected by using real time quantitative polymerase chain reaction and Western blot. Results:The contents of TGF-β1 and collagen Ⅳ in the culture medium of stably-expressed TGF-β1 MC were increased significantly, and the CA could reverse the effects of TGF-β1. The expressions of mRNA and protein of TGF-β1, Smad 2/3 and the level of Smad 2/3 phosphorylation were increased significantly in TGF-β1 transfected MC, and CA could dramatically reduce the expressions of mRNA and protein of TGF-β1, Smad 2/3 and the level of Smad 2/3 phosphorylation. The high expression of TGF-β1 decreased the expression of Smad 7 mRNA and protein, and the CA could antagonize the effect of mRNA expression. Conclusion:The MCs stably-expressed TGF-β1 can activate the TGF-β1/Smad signal pathway and increase the expression of collagen Ⅳ. CA can decrease the occurrence of diabetic nephropathy(DN) by reducing the production of collagen Ⅳ through inhibiting the TGF-β1/Smad signal pathway.

Key words: rat, diabetic nephropathy, centellaasiatica, transforming growth factor-beta 1, Smad signaling pathway, collagen Ⅳ

马继伟, 王宏天, 刘浩飞, 董磊鹏, 丁元, 白继琼, 张翥, 东莉洁. 积雪草对转染TGF-β1基因的大鼠肾小球系膜细胞Smad 2/3、Smad 7和胶原蛋白Ⅳ表达的影响[J]. 中国应用生理学杂志, 2018, 34(2): 122-125.

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积雪草对转染TGF-β1基因的大鼠肾小球系膜细胞Smad 2/3、Smad 7和胶原蛋白Ⅳ表达的影响

Effects of centellaasiatica granule on the expression of Smad 2/3, Smad 7 and collagen Ⅳ in the mesangial cells stably expressed TGF-β1

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