中国应用生理学杂志 ›› 2016, Vol. 32 ›› Issue (3): 279-282.doi: 10.13459/j.cnki.cjap.2016.03.024
Flag和GFP双标记的BKCa通道α亚基表达质粒的构建、鉴定和序列分析
李涛1, 程秀丽2, 黄文俊1, 闫莉2, 曹济民2, 谭晓秋1,2
- 1. 四川医科大学医学电生理学 省部教育部重点实验室, 四川省心血管疾病防治协同创新中心, 泸州 646000;
2. 北京协和医学院基础学院 中国医学科学院基础医学研究所生理学系, 北京 100005
Construction and identification of BKCaαsubunit expression plas-mid with double labeling of Flag and GFP
LI Tao1, CHENG Xiu-li2, HUANG Wen-jun1, YAN Li2, CAO Ji-min2, TAN Xiao-qiu1,2
- 1. Key Laboratory of Medical Electrophysiology of Ministry of Education, Collaborative Innovation Center for Prevention and Treatment of Cardiovascular Disease/Institute of Cardiovascular Research, Sichuan Medical University, Luzhou 646000;
2. Department of Physiology, Institute of Basic Medical Sciences, Chinese Academy of Medical Sciences, School of Basic Medicine, Peking Union Medical College, Beijing 100005, China
摘要： 目的：采用重叠PCR法构建表达质粒，为下一步研究通道功能奠定基础。方法：在已有编码大电导钙激活钾通道（BKCa）通道α亚单位的表达质粒pcDNA3.1-hSlo的基础上，采用重叠PCR法构建Flag和GFP双标签标记的表达质粒pcDNA3.1-Flag-hSlo-GFP （Flag-hSlo-GFP）。结果：构建的表达质粒Flag标签插入BKCa通道的S1-S2胞外环，GFP标签连接BKCa通道的胞内C末端，测序结果证实质粒构建成功。结论：成功构建BK通道基因表达质粒Flag-hSlo-GFP，重叠PCR能够很好的用于长片段基因扩增和插入片段的实验。