RNA干扰下调PTEN表达对体外活化肝星状细胞α-微管蛋白及γ-微管蛋白表达的影响

doi:10.12047/j.cjap.6022.2021.009

中国应用生理学杂志 ›› 2021, Vol. 37 ›› Issue (4): 376-379.doi: 10.12047/j.cjap.6022.2021.009

RNA干扰下调PTEN表达对体外活化肝星状细胞α-微管蛋白及γ-微管蛋白表达的影响

郝礼森^1△, 季景秀¹, 蒋美钰¹, 张明婷¹, 张晓岚², 展宗媛¹, 杨小师¹, 陈盼盼¹

1. 华北理工大学附属医院消化内科, 河北唐山 063000;
2. 河北医科大学第二医院东院消化内科, 石家庄 050000

出版日期:2021-07-28 发布日期:2021-08-09
通讯作者: ^△Tel: 0315-2038012; E-mail: haolisenl25@163.com
基金资助:
^*河北省自然科学基金资助项目( H2013209327);中国肝炎防治基金会天晴肝病研究基金资助项目(CFHPC20132078)

Online:2021-07-28 Published:2021-08-09

摘要/Abstract

摘要： 目的: 探讨RNA干扰下调第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)表达对体外活化肝星状细胞 (HSC) α-微管蛋白(α-tubulin)及γ-微管蛋白(γ-tubulin)表达的影响。方法: 2017年9月至2018年3月,以腺病毒为载体将靶向PTEN的RNA干扰序列—短发夹RNA (shRNA)转染体外培养的活化大鼠肝星状细胞系HSC-T6,实验分为3组:对照组(Control组, 以DMEM代替腺病毒液进行腺病毒转染)、Ad-GFP组(以对照空病毒Ad-GFP转染体外活化HSC)、 Ad-shRNA/PTEN组(以携带靶向PTEN的shRNA的重组腺病毒Ad-shRNA/PTEN转染体外活化HSC),每组设6个复孔。采用Western blot及实时荧光定量PCR技术检测各组HSC的PTEN蛋白及mRNA表达;免疫荧光法检测各组HSC的α-tubulin及γ-tubulin表达。结果: 与对照组及Ad-GFP组比较,Ad-shRNA/PTEN组HSC的PTEN蛋白及mRNA表达明显降低 (P＜0.05)。 HSC的α-tubulin主要表达于细胞浆,对照组和Ad-GFP组HSC的α-tubulin呈丝网状、辐射状均匀分布于细胞核周围,而Ad-shRNA/PTEN 组HSC的α-tubulin向细胞两端末梢逐渐聚集并在细胞两端稍增多;与对照组HSC的α-tubulin荧光积分光密度值(IOD) (40803.00±2006.59)及Ad-GFP组HSC的α-tubulin荧光 IOD (42302.50±2537.93)比较,Ad-shRNA/PTEN组HSC的α-tubulin荧光 IOD (101495.17 ±5005.39)明显升高(P＜0.05),而对照组与Ad-GFP组HSC的α-tubulin 荧光IOD比较差异无统计学意义(P＞0.05)。 HSC的γ-tubulin也主要表达于胞浆,并在胞浆中有散在点状聚集,但Ad-shRNA/PTEN组HSC的γ-tubulin点状聚集更明显;与对照组HSC的γ-tubulin荧光IOD (20410.68±1815.53)及Ad-GFP组HSC的γ-tubulin荧光IOD (20137.50±1469.49)比较,Ad-shRNA/PTEN组HSC的γ-tubulin荧光IOD (41310.83±1544.68) 明显升高(P＜0.05),而对照组与Ad-GFP组HSC的γ-tubulin荧光IOD比较差异无统计学意义(P＞0.05)。结论: 下调体外活化肝星状细胞的PTEN表达可显著增加其α-微管蛋白及γ-微管蛋白表达,并引起上述微管蛋白在胞浆中的分布发生变化。

关键词: 第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因, 体外活化肝星状细胞, 微管, α-微管蛋白, γ-微管蛋白

Key words: phosphatase and tension homology detected on chromosome ten, activated hepatic stellate cells in vitro, microtubule, α-tubulin, γ-tubulin

中图分类号:

R575.2

郝礼森, 季景秀, 蒋美钰, 张明婷, 张晓岚, 展宗媛, 杨小师, 陈盼盼. RNA干扰下调PTEN表达对体外活化肝星状细胞α-微管蛋白及γ-微管蛋白表达的影响[J]. 中国应用生理学杂志, 2021, 37(4): 376-379.

参考文献 17

[1]	Higashi T, Friedman SL, Hoshida Y. Hepatic stellate cells as key target in liver fibrosis [J]. Adv Drug Deliv Rev, 2017, 121: 27-42.
[2]	Puche JE, Saiman Y, Friedman SL. Hepatic stellate cells and liver fibrosis [J]. Compr Physiol, 2013, 3(4): 1473-1492.
[3]	陈信信, 张晓芸, 丁玉真, 等. 剪切应力环境下的内皮祖细胞对肝星状细胞增殖和生物功能的影响[J]. 中国应用生理学杂志, 2018, 34(5): 404-407 .
[4]	Lin WC, Wang LC, Pang TL, et al. Actin-binding protein G (AbpG) participates in modulating the actin cytoskeleton and cell migration in Dictyostelium discoideum [J]. Mol Biol Cell, 2015, 26(6): 1084-1097.
[5]	Bear JE, Haugh JM. Directed migration of mesenchymal cells: where signaling and the cytoskeleton meet [J]. Curr Opin Cell Biol, 2014, 30: 74-82.
[6]	Hendershott MC, Vale RD. Regulation of microtubule minus-end dynamics by CAMSAPs and Patronin [J]. Proc Natl Acad Sci USA, 2014, 111(16): 5860-5865.
[7]	Draber P, Draberova E. Gamma-tubulins and their functions [J]. Tsitol Genet, 2003, 37(2): 3-10.
[8]	Raynaud-Messina B, Merdes A. Gamma-tubulin complexes and micro-tubule organization [J]. Curr Opin Cell Biol, 2007, 19(1): 24-30
[9]	Lee YR, Chen M, Pandolfi PP. The functions and regulation of the PTEN tumour suppressor: new modes and prospects [J]. Nat Rev Mol Cell Biol, 2018, 19(9): 547-562.
[10]	郝礼森, 张家琪, 刘博, 等. 体外RNA干扰下调PTEN表达对肝星状细胞系HSC-T6迁移的影响[J]. 中华肝脏病杂志, 2017, 25(3): 223-225.
[11]	郝礼森, 宋小杰, 章广玲, 等. 腺病毒介导的shRNA下调PTEN表达对活化肝星状细胞骨架蛋白F-actin的影响[J]. 中国病理生理杂志, 2017, 33(3): 557-561.
[12]	Livak KJ, Schmittgen TD. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method [J]. Methods, 2001, 25(4): 402-408.
[13]	阮建佳, 杜岩. 神经酰胺合酶-神经酰胺通路在青蒿琥酯抑制肝纤维化中的作用[J]. 中国应用生理学杂志, 2020, 36(3): 279-282.
[14]	Mouneimne G, Hansen SD, Selfors LM, et al. Differential remodeling of actin cytoskeleton architecture by profilin isoforms leads to distinct effects on cell migration and invasion [J]. Cancer Cell, 2012, 22(5): 615-630.
[15]	周丽娟, 韩磊, 李力. 细胞骨架与人滋养细胞迁移关系的研究进展[J]. 解放军医学杂志, 2015, 40(7): 599-602.
[16]	Villamoruzzi E. PTPN12 controls PTEN and the AKT signalling to FAK and HER2 in migrating ovarian cancer cells[J]. Mol Cell Biochem, 2013, 375(1-2): 151-157.
[17]	郝礼森, 张晓岚, 李玉林, 等. 大鼠纤维化肝组织中PTEN的动态表达及其与肝星状细胞增殖和活化的关系[J]. 中华肝脏病杂志, 2008, 16(10): 743-747.

RNA干扰下调PTEN表达对体外活化肝星状细胞α-微管蛋白及γ-微管蛋白表达的影响

PDF (PC)

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献 17

相关文章 2

编辑推荐

Metrics

本文评价

[1]	阮建佳, 杜岩. 神经酰胺合酶-神经酰胺通路在青蒿琥酯抑制肝纤维化中的作用[J]. 中国应用生理学杂志, 2020, 36(3): 279-282.
[2]	胡泉东, 杨玉娟, 余珊珊. 脂氧素受体激动剂BML-111对大鼠急性肝损伤的干预作用及其机制^*[J]. 中国应用生理学杂志, 2020, 36(5): 494-498.