目的: 采用三种造模方法建立小鼠原发性肝癌模型,并进行比较,寻找更优化的造模方法。方法: 15日龄C3H/HeN雄性小鼠40只,随机分为Ⅰ-Ⅳ组,每组10只。Ⅰ组:不予任何处理;Ⅱ组:腹腔注射25 mg/kg的二乙基亚硝胺(DEN)一次;Ⅲ组:腹腔注射100 mg/kg的DEN一次;Ⅳ组:腹腔注射25 mg/kg的DEN一次,42日龄时再次腹腔注射100 mg/kg的DEN一次。统计各组小鼠的死亡率。造模第18周,麻醉后眼球取血,断颈处死后打开腹腔取肝脏,观察各组肝脏外观、癌结节数目及肝脏肿瘤发生率,HE染色观察肝脏组织病理学变化,并检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的浓度。结果: 造模第18周,与Ⅰ组相比,Ⅱ-Ⅳ组小鼠血清中的ALT 、AST浓度均显著升高(P＜0.05);Ⅲ组和Ⅳ组存活小鼠癌结节数目,肿瘤发生率显著增加(P＜0.05)。造模第18周时,Ⅰ组和Ⅱ组无小鼠死亡,肝癌发生率为0%;Ⅲ组和Ⅳ组存活小鼠肝癌发生率均为100%,但Ⅲ组小鼠死亡率高达50%,Ⅳ组仅为20%。结论: C3H/HeN雄性小鼠15日龄时腹腔注射25 mg/kg的DEN一次,第42日龄时再次腹腔注射100 mg/kg的DEN一次,可成功建立小鼠肝癌模型,周期短且死亡率较低,是建立原发性肝癌模型较为理想的方法。

目的: 探讨研究连续动态左心功能指标变化评价个体化精准运动整体方案强化管控3个月后的长期慢病患者心血管功能的改善情况。方法: 选取2018 年至2021 年由我们团队强化管控的长期心脑血管代谢慢病为主的患者21例,签署知情同意书后完成症状限制性极限心肺运动试验(CPET)和无创左右心功能同步检测仪(N-ISCFD)连续记录50 s心电图、桡动脉脉搏波、颈静脉脉搏波和心音图数据,根据CPET 及连续功能学监测下滴定结果制定以个体化适度运动强度为核心的整体方案进行3个月强化管控后再重复N-ISVCD数据收集。所有N-ISCFD的50 s数据按阜外医院优化报告模式进行分析计算52项左心功能学指标;强化管控前后的数据比较采用配对t检验统计学分析组群变化情况。结果: 21例长期慢病患者(16男5女),年龄为(54.05±12.77,29~75)岁,BMI为(25.53±4.04,16.62~31.7)kg/m²。与强化管控前基础值比较,患者3个月强化管控后①一般指标:体重、BMI、收缩压和舒张压均显著降低(P＜0.01);②CPET核心指标Peak VO₂从(64.93±24.22,26.96~103.48)%Pred提高为(85.22±30.31,43.95~140.48)%Pred(P＜0.01),显著平均提升(35.09±27.87,0.12~129.35)%;其他AT、Peak VO₂/HR、Peak Work Rate、OUEP、FVC、FEV₁、FEV₃/FVC%和MVV也均较管控前显著升高(P＜0.01);而Lowest VE/VCO₂和VE/VCO₂ Slope则显著降低(P＜0.01);③左右心功能核心指标:射血分数(EF)从(0.60±0.12, 0.40~0.88)%显著提高为(0.66±0.09,0.53~0.87)%(P＜0.01),平均提升(12.39±14.90,-12.32~ 41.11)%;总阻力(TPR)从(1579.52±425.45,779.46~2409.61)G/(cm⁴·s)显著降低为(1340.44±261.49,756.05~ 1827.01)G/(cm⁴·s)(P＜0.01),平均降低(12.00±17.27,-37.79~28.61)%;其他左心搏指数(LSI),心脏总功率(CTP),射流压力(EP),左室舒张末期血量(LVEDV)等指标也均显著改善(P＜0.05)。结论: CPET和连续功能学监测可安全有效制定慢病患者个体化运动整体方案,长期强化管控可安全有效地显著改善患者组群的整体功能状态,而连续动态记录左心功能指标的改变可以辅助CPET简便评价心血管功能变化。

目的: 研究刺梨对肥胖大鼠胰岛素抵抗的干预作用以及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B_β(PKB_β/Akt2)/葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)信号通路在其中的调控作用。方法: 5周龄雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC)、模型组(M)、西格列他钠阳性对照组(PC)、低剂量刺梨组(LD)和高剂量刺梨组(HD),每组10只。NC组以普通饲料喂养,M、PC、LD和HD组以高脂饲料喂养。第13周开始,按照6 ml/kg的剂量标准,LD组以100 mg/kg刺梨灌胃,HD组以300 mg/kg刺梨灌胃,PC组以0.11 g/kg西格列他钠灌胃,NC组、M组以等体积的生理盐水灌胃。实验直至20周,每周测量大鼠体质量,末次实验结束后24 h处死大鼠,取血液和骨骼肌,比色法检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量,黄嘌呤氧化酶法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法检测血清丙二醛(MDA)含量,葡萄糖氧化酶法检测血糖(FBG)值,酶联免疫吸附法检测胰岛素(FINS)含量,蛋白免疫印迹和逆转录-聚合酶链反应法检测PI3K、Akt2、GLUT4蛋白、基因表达。结果: 与NC组比较,M组体质量、血清MDA、TG、TC、FBG、FINS、HOMA-IR水平显著升高(P＜0.01),SOD活性、PI3K、Akt2、GLUT4蛋白和mRNA表达水平显著降低(P＜0.01)。与M组比较,LD组、HD组和PC组体质量、血清MDA、TG、TC、FBG、FINS、HOMA-IR水平均显著降低(P＜0.05或P＜0.01), SOD活性、PI3K、Akt2、GLUT4蛋白和mRNA表达水平均显著升高(P＜0.05或P＜ 0.01)。结论: 刺梨可通过抗氧化应激以及上调PI3K、Akt2、GLUT4蛋白、基因的表达改善肥胖大鼠胰岛素抵抗,其分子机制可能与PI3K/Akt2/GLUT4信号通路有关。

目的: 研究有氧间歇运动调节KLF15/mTOR相关蛋白表达改善2型糖尿病大鼠骨骼肌病变的作用。方法: 采用高脂饲料喂养4周配合腹腔注射链脲佐菌素的方法制备2型糖尿病大鼠实验模型。成模后,大鼠随机分为2组:糖尿病模型组(DM)、糖尿病+运动组(DE),另设对照组(C)。每组10只。DE组给予8周有氧间歇跑台运动干预,C组不施加任何干预。实验末,采用Western blot法检测腓肠肌KLF15、mTOR 、p-mTOR、cleaved caspase-3表达,HE染色、TUNEL荧光染色法等分别观察腓肠肌形态结构,骨骼肌细胞凋亡和肌质量的变化,同时测试血糖、血胰岛素指标。结果: ①与C组比较,DM组腓肠肌湿重、体重和腓肠肌湿重/体重比值均显著降低(P＜0.05或P＜0.01);与DM组比较,DE组腓肠肌湿重、腓肠肌湿重/体重比值显著增加(均P＜0.05)。②与C组比较,DM组空腹血糖显著升高(P＜0.01),胰岛素水平显著降低(P＜0.01);与DM组比较,DE组空腹血糖水平显著降低(P＜ 0.05),胰岛素水平显著增加(P＜0.05)。③与C组比较,病理观察DM组骨骼肌细胞形态异常,肌核增多,横纹模糊消失,肌节出现节断性损伤、部分肌纤维有溶解等现象;与DM组比较,DE组的细胞形态异常、肌节的节断性损伤和肌纤维的溶解等现象均有一定程度改善,肌膜较完整、肌核排列渐趋整齐。④与C组比较,DM组骨骼肌KLF15、细胞凋亡率和cleaved caspase-3蛋白表达显著升高(P＜0.01),p-mTOR/mTOR水平显著降低(P＜0.01);与DM组比较,DE组的KLF15、细胞凋亡率和cleaved caspase-3表达显著降低(P＜0.05或P＜0.01),该组的p-mTOR/mTOR水平显著增加(P＜0.05)。结论: 有氧间歇运动有利于改善2型糖尿病大鼠骨骼肌病变,其原因可能是通过有效调节KLF15/mTOR相关蛋白表达,一定程度减少细胞凋亡损伤实现。

目的: 研究有氧运动训练对自发性高血压大鼠(SHR)肾脏纤维化影响, 探讨有氧运动对高血压肾损害的保护作用。方法: 8周龄雄性SHR和同龄Wistar京都大鼠(WKY)随机分为4组(n=6):安静WKY对照组(WKY-S)、安静SHR对照组(SHR-S)、低强度运动组(SHR-L)和中强度运动组(SHR-M)。SHR-L组、SHR-M组分别以14 m/min(最大有氧速度的35%)、20 m/min(最大有氧速度的50%)在0°坡度的运动跑步机上跑步,共运动14周,每周5次,每次60 min,WKY-S和SHR-S组安静饲养。14周后,运动训练结束72 h后检测大鼠血压;之后取血和肾脏检测血清肌酐SCr和尿素氮BUN含量,苏木精与伊红(HE)染色观察肾组织形态,Masson染色观察肾组织胶原沉积情况,计算肾脏胶原容积分数(CVF),检测肾脏 AngⅡ、AT1R、TGF-β、α-SMA、CTGF蛋白表达。结果: 与WKY-S组相比,SHR-S组的血压和血清SCr、BUN含量、肾脏CVF水平和AngⅡ、AT1R、TGF-β、α-SMA、CTGF蛋白表达均明显升高(P＜0.05);与SHR-S组相比,SHR-L组和SHR-M组血压和血清SCr、BUN含量、肾脏CVF水平和AngⅡ、AT1R、TGF-β、α-SMA、CTGF蛋白表达均明显下降(P＜0.05)且SHR-M组下降趋势更明显(P＜0.05)。结论: 有氧运动可通过抑制肾脏AngⅡ-AT1R-TGF-β通路,改善自发性高血压大鼠的肾纤维化与肾功能。

目的: 研究冷暴露介导小鼠回肠机械屏障损伤及其机制。方法: 将20只小鼠随机分为对照组和冷暴露组,每组10只。对照组和冷暴露组均置于(24±2)℃,湿度为40%的气候室内,冷暴露组小鼠每日移至(4±2)℃的气候室内3 h,连续冷暴露三周。三周后采集小鼠回肠组织,通过苏木素伊红染色、Masson染色观察小鼠回肠组织结构变化,通过Western blot检测回肠组织紧密连接、炎症细胞因子、核因子-κB通路的相关蛋白表达水平。结果: 与对照组相比,冷暴露小鼠回肠组织环形肌层变薄,大量的炎症细胞浸润、绒毛长度变短,隐窝深度增大,出现组织纤维化;与对照组比较,冷暴露小鼠的回肠紧密连接相关蛋白表达水平均显著下调(P＜0.05),白细胞介素-1β、白细胞介素-6、p-p65蛋白表达水平均显著上调(P＜0.05)。结论: 冷暴露能够损伤小鼠回肠组织紧密连接,破坏机械屏障的完整性,其机制与激活NF-κB信号通路,促进炎症反应的发生有关。

目的: 探讨迷走神经刺激(VNS)对难治性癫痫(IE)模型大鼠海马神经炎性反应及α7nAChR表达的影响。方法: 80只成年雄性SD大鼠,SPF级,随机分为对照组、模型组、VNS组、甲基牛扁亭(MLA)+VNS组,其中对照组与MLA+VNS组分别20只,模型组与VNS组因模型制作失败与动物死亡,分别剩下15只和14只。除对照组之外,其余各组皆通过腹腔注射皮罗卡品建立氯化锂-皮罗卡品IE大鼠模型。对照组仅分离迷走神经,不采取电刺激;模型组不采取任何干预措施;VNS组在模型制作成功后7 d采取VNS,连续4周;MLA+VNS组先侧脑室给药MLA(3.4 μg/μl,5 μl),然后给予VNS,连续4周。观察并记录各组大鼠癫痫发作的次数与持续时间的变化;然后断头处死大鼠,快速分离海马并制备10%组织匀浆,离心并提取上清液,通过分光光度法测定上清液中AChE、ChAT活性;ELISA法检测TNF-ɑ、IL-6和IL-1β表达;Western blot检测海马组织α7nAChR蛋白表达;免疫荧光染色法检测海马组织α7nAChR与小胶质细胞共表达。结果: ①通过VNS治疗4周后,大鼠癫痫发作的频率以及持续的时间都明显低于模型组(P<0.01);MLA阻断后在给予VNS,大鼠癫痫发作的频率以及持续的时间也明显低于模型组,但高于VNS组(P<0.01)。②与对照组比较,模型组大鼠海马组织ChAT表达明显下降,AChE表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,VNS组与MLA+VNS组大鼠海马组织ChAT表达明显升高,AChE表达明显降低(P< 0.01);与VNS组比较,MLA+VNS组大鼠海马组织ChAT、AChE表达无明显变化(P>0.05)。③与对照组比较,模型组大鼠海马组织TNF-ɑ、IL-6和IL-1β表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,VNS组大鼠海马组织TNF-ɑ、IL-6和IL-1β表达明显降低(P<0.01);与VNS组比较,MLA+VNS组大鼠海马组织TNF-ɑ、IL-6和IL-1β表达明显升高(P<0.01)。④与对照组比较,模型组大鼠海马组织以及小胶质细胞上α7nAChR表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,VNS组大鼠海马组织以及小胶质细胞上α7nAChR表达明显上调(P<0.01);与VNS组比较,MLA+VNS组海马小胶质细胞上共表达α7nAChR数量明显减少(P<0.01)。结论: VNS对IE大鼠有明显的治疗作用,其机制可能是通过直接激活海马小胶质细胞CAP,抑制海马神经炎性反应来实现的。

目的: 建立优化的年轻与老年大鼠神经组织星形胶质细胞的分离纯化方法,比较年轻大鼠与老年大鼠星形胶质细胞的形态、功能差异,探讨老化后星形胶质细胞的功能改变及其在衰老过程中发挥的可能机制。方法: 采用50%-35%的percoll密度梯度离心法分选年轻(2月龄)和老年(20月龄)SD大鼠的大脑与脊髓星形胶质细胞;每组细胞设置3个复孔,培养72 h后,采用免疫荧光检测星形胶质细胞特异性标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP),观察不同年龄阶段星形胶质细胞的形态特征;qPCR检测衰老标志(p16、p21)的表达,β-半乳糖苷酶染色检测星形胶质细胞的衰老情况;qPCR检测促炎因子(IL-1β、TNF-α)与抗炎因子(IL-10)的表达水平。结果: 采用50%-35%的percoll梯度分选得到的星形胶质细胞的数量多、活性好、纯度高达95%以上,可用于后续实验。与年轻大鼠神经组织的星形胶质细胞相比,分选自老年大鼠神经组织的星形胶质细胞在细胞形态上偏向激活态,突起较少;星形胶质细胞β-半乳糖苷酶染色阳性率升高,p16、p21表达也明显增多(P<0.01);老年大鼠神经组织的星形胶质细胞的促炎因子(IL-1β、TNF-α)表达升高(P<0.05),抗炎因子(IL-10)表达有所降低(P<0.05)。结论: 50%-35%的percoll梯度可以作为大鼠神经组织星形胶质细胞的分选纯化、原代培养的方法;随着年龄的增加,星形胶质细胞发生细胞老化,表现出促炎症表型,促进神经系统的炎性衰老,可能是神经系统老化及神经退行性疾病的机制之一。

目的: 探索三种多酚类化合物对高原低氧暴露小鼠肠道菌群的保护作用。方法: 将60只雄性Balb/c小鼠随机分为平原对照组、模拟高原低氧组、高原原花青素组、高原槲皮素组、高原白藜芦醇组,每组12只。原花青素、槲皮素、白藜芦醇分别以50 mg/kg ,100 mg/kg,20 mg/kg的剂量进行灌胃,三种药物干预且高原模拟舱模拟海拔6 000 m暴露30 d后,收集血清进行二胺氧化酶(DAO)检测,收集小鼠无菌粪便,回肠组织固定并HE染色,16S rRNA技术检测小鼠肠道菌群多样性以及菌群组成。 结果: HE染色结果显示,模拟高原低氧组较平原对照组回肠组织损伤明显,血清DAO浓度显著升高(P＜0.05),但肠道菌群物种丰度、菌群多样性差异无统计学意义。与模拟高原低氧组相比,高原槲皮素、白藜芦醇组小鼠回肠组织结构得以改善,血清DAO水平降低,且肠道菌群物种丰度、α多样性降低(P＜0.05),拟杆菌相对丰度降低(P＜0.05),厚壁菌升高(P＜0.05),谷氨酸棒状杆菌、罗伊氏乳杆菌相对丰度升高(P＜0.05)。结论: 槲皮素和白藜芦醇可有效增加小鼠有益菌群的丰度,抑制并降低条件致病菌,对高原低氧暴露小鼠肠道有一定的保护作用。

目的: 探讨组织蛋白酶K(CatK)对大鼠海马空间学习和记忆功能的影响及其神经化学机制。方法: SD雄性大鼠随机分为对照组(Control组)和CatK阻断组(CatK Ⅱ组)每组各10只,分别于海马DG区微量注射组织蛋白酶K特异性阻断剂(0.5 μg/μl)和等量人工脑脊液5 d;原代培养海马神经元细胞,设对照组(CON组)、阴性对照组(NC组)和siRNA干扰组(siCatK组),每组设3个复孔,siRNA导入18～20 h后收集样本。应用Morris水迷宫评估大鼠空间学习和记忆功能,同时在大鼠清醒、自由活动状态下,结合脑部微量透析法和高效液相色谱法观察学习记忆过程中DG区细胞外液中谷氨酸(Glu)含量的动态变化;采用蛋白免疫印迹法检测海马组织和神经元细胞中c-Notch1、Notch1、p-CREB、BDNF等相关信号蛋白的表达情况。结果: 动物实验显示,与Control组相比,CatK Ⅱ组空间学习记忆能力明显减弱,并伴随着海马组织的c-Notch1、p-Akt、p-CREB和BDNF蛋白表达明显下降(P＜ 0.05);Control组和CatK II组DG区Glu含量均随水迷宫训练天数的增加而明显升高,但CatK Ⅱ组升高幅度均明显弱于Control组(P＜0.05)。细胞实验结果显示,与CON组和NC组相比,siCatK组CatK、c-Notch1、p-CREB和BDNF蛋白表达明显减少(P＜0.05)。结论: CatK可通过激活海马Notch1及其记忆相关信号蛋白,影响大鼠空间学习记忆功能。

目的: 探究改良隔日禁食联合运动对大鼠脂肪量、肌肉量的影响以及对血清鸢尾素(Irisin)、FNDC5和UCP1蛋白的变化。方法: 选取32只健康的8周龄SPF级雄性SD大鼠,随机分为对照组(Con,8只)、运动组(Exer,8只)、改良隔日禁食组(ADMF,8只)和改良隔日禁食联合运动组(ADMF-Exer,8只),Exer组进行中等运动强度跑台运动(60 min/d,5日/周),ADMF组部分禁食和自由摄食隔天交替进行,禁食日给予25%基础能量的饲料,ADMF-Exer组进行两种联合干预,称量记录大鼠每日进食量,每周测量大鼠体重。干预4周后检测大鼠体脂率,心尖取血和腹主动脉取血致死,保留并离心血清,称量大鼠双侧腓肠肌、双侧肾周脂肪和肩胛处棕色脂肪湿重,并取样制作石蜡切片和进行HE染色,统计细胞面积;用ELISA检测血清Irisin水平,Western blot实验检测腓肠肌中FNDC5蛋白表达,脂肪组织中UCP1蛋白表达。结果: 4周干预后,与Con组相比,Exer组、ADMF组和ADMF-Exer组三个组的能量摄入、体重和体脂都明显降低(P＜0.05),白色脂肪湿重/体重和脂肪细胞面积显著减少(P＜0.01),肩胛脂肪湿重/体重无显著差异(P＞0.05),与Con组相比,ADMF组腓肠肌湿重/体重明显减少(P＜0.05),ADMF-Exer组明显增多(P＜0.05),Exer组和ADMF-Exer组肌肉横截面积增大(P＜0.05),ADMF-Exer组的腓肠肌FNDC5蛋白含量、血清Irisin水平和脂肪UCP1蛋白表达都显著升高(P＜0.05);4周干预后,与Exer组相比,ADMF组和ADMF-Exer组能量摄入都明显降低(P＜0.01),ADMF-Exer组体重明显降低(P＜0.05),与Exer组相比,ADMF组和ADMF-Exer组体脂含量、白色脂肪湿重/体重和肩胛脂肪湿重/体重无显著性差异(P＞0.05),ADMF-Exer组脂肪细胞面积显著减小(P＜0.05),与Exer组相比,ADMF组腓肠肌湿重/体重显著降低(P＜0.05),与Exer组相比,ADMF-Exer组FNDC5蛋白含量、血清Irisin和脂肪UCP1蛋白表达都显著升高(P＜0.05)。结论: 改良隔日禁食联合运动干预可有效控制大鼠的体重、减少体脂,其机制可能是通过FNDC5/Irisin- UCP1通路,诱导白色脂肪组织棕色化和增加棕色脂肪产热作用。

目的: 研究雌二醇(E2)通过雌激素受体β(ERβ)介导细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路激活减轻心肌缺血/再灌注(I/R)损伤的作用及机制。方法: 84只成年雌性SD大鼠进行去卵巢手术并随机分为:对照组、NC-siRNA腺相关病毒(AAV)组进行假手术,I/R组、E2+I/R组、NC-siRNA AAV+I/R组、NC-siRNA AAV+E2+I/R组、ERβ-siRNA AAV+E2+I/R组。采用冠状动脉左前降支结扎的方法制备心肌I/R损伤模型,E2+I/R组、NC-siRNA AAV+E2+I/R组、ERβ-siRNA AAV+E2+I/R组造模前给予E2灌胃、连续60 d,NC-siRNA AAV+I/R组、NC-siRNA AAV+E2+I/R组、ERβ-siRNA AAV+E2+I/R组造模前24 h给予相应AAV尾静脉注射。再灌注120 min后,检测血清乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)、磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量,心肌梗死面积,心肌中ERβ、p-ERK表达水平及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、丙二醛(MDA)、总抗氧化力(T-AOC)的含量。结果: I/R组的血清LDH、CK、CK-MB含量、心肌梗死面积及心肌中TNF-α、IL-1β、MDA的含量均高于对照组,心肌中ERβ、p-ERK的表达水平及T-AOC的含量均低于对照组(P＜0.05);E2+I/R组的血清LDH、CK、CK-MB含量、心肌梗死面积及心肌中TNF-α、IL-1β、MDA的含量均低于I/R组,心肌中ERβ、p-ERK的表达水平及T-AOC的含量均高于I/R组(P＜0.05);尾静脉注射ERβ-siRNA AAV敲低ERβ的表达后,ERβ-siRNA AAV+E2+I/R组的血清LDH、CK、CK-MB含量、心肌梗死面积及心肌中TNF-α、IL-1β、MDA的含量均高于NC-siRNA AAV+E2+I/R组,心肌中ERβ、p-ERK的表达水平及T-AOC的含量均低于NC-siRNA AAV+E2+I/R组(P＜0.05)。结论: 雌二醇对去卵巢大鼠心肌I/R损伤具有保护作用,该作用与促进ERβ介导ERK通路激活、减轻炎症反应及氧化应激反应有关。

目的: 研究白藜芦醇(RSV)对高原低压低氧大鼠心功能的保护作用及机制。方法: 将36只大鼠按照随机数字法分为对照组(Control, C)、低压低氧组(HH)和低压低氧+RSV组(HH+RSV),每组12只。HH组和HH+RSV组大鼠在低压氧舱模拟海拔6 000 m,20 h / d进行慢性长期高原低压低氧干预8周,RSV灌喂浓度为400 mg/(kg·d)。大鼠每周检测1次体重、2次摄食量,大鼠处死前采用血细胞分析仪检测各组血常规指标、超声心动图检测各组大鼠心功能指标,采用HE染色评价心肌肥厚情况,采用二氢乙啶( DHE)染色评价心肌组织活性氧水平,采用血清及心肌组织总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶活性(SOD)、丙二醛(MDA)含量评价氧化应激情况。结果: 与C组相比,HH组大鼠体质量和摄食量显著降低(P＜0.05);而与HH组相比,HH+RSV组大鼠体质量及摄食量无显著影响(P＞0.05)。血常规结果显示,与C组相比,HH组大鼠红细胞和血红蛋白显著升高(P＜0.05),血小板浓度显著降低(P＜0.05);与HH组相比,HH+RSV组大鼠红细胞和血红蛋白水平显著降低(P＜0.05),血小板浓度显著升高(P＜0.05)。与C组相比,HH组心脏系数、心肌纤维直径和厚度显著增大(P＜0.05);与HH组相比,HH+RSV组大鼠心脏系数和心肌纤维厚度显著下降(P＜0.05)。超声心动图分析显示,与C组相比,HH组大鼠心室壁厚度显著增加(P＜0.05),射血分数及心输出量显著降低(P＜0.05);与HH组相比,HH+RSV组大鼠心室壁厚度显著降低,心脏功能显著改善(P＜0.05)。DHE染色结果显示,与C组相比,HH组大鼠心肌组织活性氧水平显著升高(P＜0.05);与HH组相比,HH+RSV组大鼠心肌组织活性氧水平明显恢复(P＜0.05)。氧化抗氧化结果显示,与C组相比,HH组大鼠血清及心肌T-AOC、SOD活性显著降低(P＜0.05),MDA含量显著升高(P＜0.05);与HH组相比,HH+RSV组大鼠血清及心肌T-AOC、SOD活性显著升高(P＜0.05),MDA含量显著降低(P＜0.05)。结论: 长期高原低压低氧暴露导致大鼠心肌肥厚、心功能下降,白藜芦醇干预可以显著改善高原低压低氧暴露导致的大鼠心肌肥厚及心功能降低,这与其降低活性氧改善心肌氧化应激水平密切相关。

目的: 探讨三七总皂苷(PNS)对肺动脉高压(PAH)大鼠肺血管重构及SIRT1/FOXO3a/p27通路的影响。方法: 将体重200~250 g雄性SD大鼠随机分为对照组(Control),野百合碱组(MCT),野百合碱+三七总皂苷组(MCT+PNS),每组各10只。Control组:第1日腹腔注射生理盐水3 ml/kg,随后每天腹腔注射生理盐水2.5 ml/kg;MCT组:第1日腹腔注射MCT 60 mg/kg,随后每天注射2.5 ml/kg 生理盐水;MCT+PNS组:第1日腹腔注射MCT 60 mg/kg,随后每天腹腔注射PNS 50 mg/kg,常规饲养4周。造模完成后,采用右心导管法检测各组大鼠平均肺动脉压(mPAP)、右心室收缩压(RVSP),称重并计算右心室肥厚指数(RVHI),HE和Masson染色观察肺血管结构和形态变化,qPCR和Western blot检测SIRT1、FOXO3a、p27、PCNA和Caspase-3的蛋白和基因层面的表达变化。结果: 与Control组相比,MCT组mPAP、RVSP和RVHI均显著上升(P＜0.01),肺血管明显增厚以及胶原纤维增多,SIRT1、FOXO3a、p27和Caspase-3蛋白和基因表达均下降(P＜0.05或P＜0.01),PCNA蛋白和基因表达均增多(P＜0.05);与MCT组相比,MCT+PNS组mPAP、RVSP和RVHI显著下降(P＜0.05或P＜0.01),肺血管增厚得到改善以及胶原纤维减少,SIRT1、FOXO3a、p27和Caspase-3蛋白和基因表达均增多(P＜0.05或P＜0.01),PCNA蛋白和基因表达均降低(P＜0.05或P＜0.01)。结论: 三七总皂苷可通过激活SIRT1/FOXO3a/p27通路缓解肺动脉高压大鼠的肺血管重构。

目的: 探究高原移居中青年男性走、跑状态运动能耗及外周血单个核细胞(PBMC)线粒体自噬标志物变化特征。方法: 招募152名受试者,根据移居高原年限分为高原移居Ⅰ组(HM1)、高原移居Ⅱ组(HM2)、高原移居Ⅲ组(HM3)、世居高原组(Con)。检测受试者3.0 km/h 、4.5 km/h、6.0 km/h及7.5 km/h条件下运动能耗;ELISA检测受试者PBMC线粒体NADH-Q氧化还原酶、琥珀酸-Q氧化还原酶、UQ-细胞色素C氧化还原酶、细胞色素C氧化酶水平;RT-PCR和Western blot检测受试者PBMC线粒体Parkin、PINK3、LC3A、LC3B mRNA及蛋白表达水平。结果: 与Con组比较,HM1、HM2组3 km/h步行能耗显著上升(P＜ 0.05);与HM1组比较,HM2组显著降低(P＜0.05) 。与Con组比较,HM1组4.5 km/h、6 km/h及7.5 km/h走、跑能耗均显著上升(P＜0.05) 。与Con组比较,HM1、HM2和HM3组复合物Ⅰ、复合物Ⅱ及复合物Ⅲ水平均显著降低(P＜0.05) ;与HM1组和HM2组比较,HM3组显著上升(P＜0.05) ;与HM1组比较,HM2组显著上升(P＜0.05) 。与Con组比较,HM1、HM2组复合物Ⅳ水平显著降低(P＜0.05) ;与HM1组和HM2组比较,HM3组显著上升(P＜0.05) 。与Con组比较,HM1、HM2和HM3组Parkin mRNA表达显著上升(P＜0.05) ,HM1、HM2组高于HM3组(P＜0.05) ;与Con组比较,HM1、HM2和HM3组PINK3 mRNA表达显著降低(P＜0.05) ,HM1组显著低于HM2、HM3组(P＜0.05) ;与Con组比较,HM1、HM2和HM3组LC3A mRNA表达显著降低(P＜0.05) ,HM1组和HM2组显著低于HM3组,HM1组显著低于HM2组(P＜0.05) ;与Con组比较,HM1、HM2和HM3组LC3B mRNA和LC3B蛋白表达显著上升(P＜0.05) ,HM1组和HM2组显著高于HM3组,HM1组显著低于HM2组(P＜0.05) 。与Con组比较,HM1、HM2组Parkin蛋白表达显著上升(P＜0.05) ,HM1组、HM2组显著高于HM3组(P＜0.05) ;与Con组比较,HM1、HM2组PINK3和LC3A蛋白表达显著降低(P＜0.05) ,HM1组、HM2组显著低于HM3组(P＜0.05) 。结论: 高原移居者随高原移居时间延长,PBMC线粒体自噬水平逐步下降,PBMC线粒体呼吸酶活性逐渐增殖;高原定量负荷运动能量消耗逐渐降低。

目的: 探讨丁苯酞对睡眠剥夺大鼠脑额叶高迁移率族蛋白1(HMGB1)和晚期糖基化终产物受体(RAGE)表达的影响。方法: 建立Sprague Dawley(SD)大鼠慢性睡眠剥夺和丁苯酞干预模型,共分为3组(n＝6):大平台对照组、慢性睡眠剥夺组、慢性睡眠剥夺＋丁苯酞组,慢性睡眠剥夺组采用睡眠剥夺箱对大鼠进28 d,18 h/d的睡眠剥夺,慢性睡眠剥夺＋丁苯酞组在睡眠剥夺28 d后腹腔注射丁苯酞100 mg/(kg·d),共14 d。各组大鼠取脑部标本,免疫组化检测额叶高迁移率族蛋白1 (HMGB1)、核转录因子kappB(NF-κB) p65表达,Western blot检测大鼠额叶HMGB1、沉默信息调节因子1(SIRT1)、晚期糖基化终产物(RAGE)、NF-κB表达。结果: 与大平台对照组比较,慢性睡眠剥夺组大鼠额叶HMGB1、RAGE、细胞核NF-κBp65表达显著增多(P均＜0.05),而SIRT1表达显著减少(P＜0.05);与慢性睡眠剥夺组比较,慢性睡眠剥夺＋丁苯酞组大鼠额叶HMGB1、RAGE、细胞核NF-κBp65表达显著减少(P均＜0.05),而SIRT1表达显著增加(P＜0.05)。结论: 丁苯酞可通过改变慢性睡眠剥夺大鼠额叶HMGB1和RAGE表达,减少NF-κBp65的核转移,抑制额叶HMGB1/RAGE/NF-κB信号通路。

目的: 探究一次性力竭运动对大鼠凝血状态的影响及其机制。方法: 48只SD大鼠随机分为对照组和力竭运动组,每组24只。力竭运动组大鼠采用无坡度跑台进行一次性跑台训练25～50 min,以5 m/min的初始速度匀加速运动至25 m/min,直至大鼠力竭。训练结束后利用血栓弹力图监测大鼠凝血功能;建立下腔静脉结扎模型评估血栓形成倾向;流式细胞术检测磷脂酰丝氨酸(PS)外翻和Ca²⁺浓度;酶标仪检测FXa和凝血酶生成;血凝仪检测凝血时间。结果: 与对照组比较,力竭运动组大鼠血液呈高凝状态,血栓形成几率、重量、长度及其比值均明显升高(P＜0.01),大鼠红细胞和血小板PS外翻水平均明显升高(P＜0.01),且细胞内Ca²⁺浓度明显升高(P＜ 0.01),大鼠红细胞和血小板凝血时间明显缩短(P＜0.01),FXa和凝血酶生成明显升高(P＜0.01),且均可被乳粘素(Lact)抑制(P＜0.01)。结论: 力竭运动大鼠血液呈高凝状态,血栓形成风险增高,力竭运动导致的Ca²⁺依赖的红细胞及血小板PS外翻增多可能是其血栓形成的重要机制。

目的: 探讨敲低ACC1对人胶质瘤U251细胞迁移的作用及机制。方法: 选用人胶质瘤U251细胞系。实验分为三部分,实验一:通过慢病毒转染建立稳定低表达ACC1的U251细胞株(shACC1)及其对照(NC),Transwell迁移及划痕实验检测细胞迁移,WB检测ACC1、Vimentin、Fibronectin、N-cadherin、E-cadherin、Slug蛋白表达;实验二:探索并验证敲低ACC1后下游关键分子PAI-1表达量升高。应用其抑制剂PAI-039处理细胞,Transwell迁移及划痕实验检测细胞迁移,WB检测ACC1、PAI-1、Vimentin、Fibronectin、N-cadherin、E-cadherin、Slug蛋白表达;实验三:探索敲低ACC1调节PAI-1的分子机制,检测细胞乙酰辅酶A水平及组蛋白H3乙酰化。使用乙酰基转移酶抑制剂C646处理细胞,Transwell迁移及划痕实验检测细胞迁移,WB检测ACC1、H3K9ac、PAI-1、Vimentin、Fibronectin、N-cadherin、E-cadherin、Slug蛋白表达,RT-qPCR检测PAI-1 mRNA水平;每项实验重复三次。结果: 实验一:对胶质瘤U251细胞进行慢病毒转染,WB结果显示,与NC组相比,shACC1组ACC1表达水平显著降低,提示慢病毒转染成功(P＜0.01),shACC1组迁移细胞数明显增多(P＜0.01),迁移相关蛋白Vimentin、Fibronectin、N-cadherin、Slug表达上调,E-cadherin表达下调(P＜0.01);实验二:与NC组相比,shACC1组PAI-1 mRNA水平上调;进一步使用PAI-1的抑制剂PAI-039,与对照组相比,shACC1+PAI-039组细胞迁移数减少,且呈浓度依赖性(P＜0.01),迁移相关蛋白Vimentin、Fibronectin、N-cadherin、Slug表达上调,E-cadherin表达下调(P＜0.01);实验三:与NC组相比,shACC1组乙酰辅酶A浓度显著增加(P＜0.01),H3K9ac表达水平明显升高(P＜0.01);进一步使用组蛋白乙酰基转移酶抑制剂C646处理细胞后,PAI-1 mRNA水平下降,与对照组相比,shACC1+C646组细胞迁移数减少,且呈浓度依赖性(P＜0.01),H3K9ac表达水平降低,迁移相关蛋白Vimentin、Fibronectin、N-cadherin、Slug表达上调,E-cadherin表达下调(P＜0.01);结论: 敲低ACC1通过增加组蛋白乙酰化修饰水平上调PAI-1促进人胶质瘤U251细胞的迁移。

目的: 探索慢性不可预见性温和性刺激(CUMS)所致焦虑障碍小鼠额叶皮层与海马锥体神经元兴奋/抑制(E/I)平衡的变化。方法: 24只C57/BL6雄性小鼠随机区组分为对照组(CTRL)与模型组(CUMS),每组12只。CUMS组小鼠进行为期21 d的应激,包括束缚1 h、昼夜颠倒24 h、温水强迫游泳5 min、禁食/禁水24 h、潮湿环境饲养18 h、摇晃鼠笼30 min、白噪音1 h、社交应激10 min,CTRL组小鼠正常饲养。随后进行焦虑相关行为学及全细胞记录检测。结果: 与CTRL组比较,CUMS组小鼠旷场试验中进入中央区时间明显减少(P＜0.01),高架十字迷宫实验中进入开臂的时间明显减少(P＜0.01)、次数明显减少(P＜0.01),闭臂停留时间明显增加(P＜0.01),小鼠dlPFC、mPFC、vCA1锥体神经元sEPSC频率、电容量与E/I比值均明显增加(P＜0.01),sEPSC幅度、sIPSC频率、幅度、电容量均无明显改变(P＞0.05);而小鼠dCA1锥体神经元sEPSC与sIPSC的频率、幅度、电容量及E/I比值,则均无明显改变(P＞0.05)。结论: CUMS所致小鼠焦虑样行为,可能是多脑区参与的结果,主要与dlPFC、mPFC、vCA1脑区的锥体神经元兴奋性增加有关,而与dCA1脑区似乎关系不大。

目的: 探讨氢(H₂₎对高同型半胱氨酸血症(HHcy)大鼠的同型半胱氨酸(Hcy)水平和非酒精性脂肪肝的缓解作用。方法: Wistar大鼠一周适应性饲养后,随机分为普食组(CHOW)、高蛋氨酸组(HMD)和高蛋氨酸加富氢水组(HMD+HRW)三组,每组8只,CHOW组使用AIN-93G饲料,HMD和HMD+HRW使用AIN-93G+2%蛋氨酸饲料构建HHcy模型,HMD+HRW组同时使用富氢水灌胃(每只3 ml,每天2次,氢浓度为0.8 mmol/L),记录体重数据。饲养6周后处理取材,取大鼠血浆和肝脏,分别检测各组血浆同型半胱氨酸(Hcy)、脂质含量,进行肝脏的组织形态学观察、检测肝脏的Hcy代谢途径关键酶活性和mRNA的表达。结果: 与CHOW组大鼠相比,HMD大鼠血液中Hcy显著升高,差异均具有统计学意义(P＜0.05),病理组织切片观察到大鼠肝肿大,出现损伤并伴有脂肪肝;与HMD组大鼠相比,HMD+HRW组大鼠血液中Hcy明显下降,肝脏损伤减轻,肝脏中Hcy代谢关键酶活性和mRNA表达提高,且差异均具有统计学差异(P＜0.05)。结论: 氢对HMD饮食诱导的HHcy大鼠肝脏损伤有显著的改善作用,可能主要通过增强Hcy三条代谢途径代谢酶来降低体内过量的Hcy,从而改善肝脏代谢功能和非酒精性脂肪肝症状。