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中国应用生理学杂志 ›› 2021, Vol. 37 ›› Issue (4): 376-379.doi: 10.12047/j.cjap.6022.2021.009

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RNA干扰下调PTEN表达对体外活化肝星状细胞α-微管蛋白及γ-微管蛋白表达的影响

郝礼森1△, 季景秀1, 蒋美钰1, 张明婷1, 张晓岚2, 展宗媛1, 杨小师1, 陈盼盼1   

  1. 1. 华北理工大学附属医院消化内科, 河北 唐山 063000;
    2. 河北医科大学第二医院东院消化内科, 石家庄 050000
  • 出版日期:2021-07-28 发布日期:2021-08-09
  • 通讯作者: Tel: 0315-2038012; E-mail: haolisenl25@163.com
  • 基金资助:
    *河北省自然科学基金资助项目( H2013209327);中国肝炎防治基金会天晴肝病研究基金资助项目(CFHPC20132078)

  • Online:2021-07-28 Published:2021-08-09

摘要: 目的: 探讨RNA干扰下调第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)表达对体外活化肝星状细胞 (HSC) α-微管蛋白(α-tubulin)及γ-微管蛋白(γ-tubulin)表达的影响。方法: 2017年9月至2018年3月,以腺病毒为载体将靶向PTEN的RNA干扰序列—短发夹RNA (shRNA)转染体外培养的活化大鼠肝星状细胞系HSC-T6,实验分为3组:对照组(Control组, 以DMEM代替腺病毒液进行腺病毒转染)、Ad-GFP组(以对照空病毒Ad-GFP转染体外活化HSC)、 Ad-shRNA/PTEN组(以携带靶向PTEN的shRNA的重组腺病毒Ad-shRNA/PTEN转染体外活化HSC),每组设6个复孔。采用Western blot及实时荧光定量PCR技术检测各组HSC的PTEN蛋白及mRNA表达;免疫荧光法检测各组HSC的α-tubulin及γ-tubulin表达。结果: 与对照组及Ad-GFP组比较,Ad-shRNA/PTEN组HSC的PTEN蛋白及mRNA表达明显降低 (P<0.05)。 HSC的α-tubulin主要表达于细胞浆,对照组和Ad-GFP组HSC的α-tubulin呈丝网状、辐射状均匀分布于细胞核周围,而Ad-shRNA/PTEN 组HSC的α-tubulin向细胞两端末梢逐渐聚集并在细胞两端稍增多;与对照组HSC的α-tubulin荧光积分光密度值(IOD) (40803.00±2006.59)及Ad-GFP组HSC的α-tubulin荧光 IOD (42302.50±2537.93)比较,Ad-shRNA/PTEN组HSC的α-tubulin荧光 IOD (101495.17 ±5005.39)明显升高(P<0.05),而对照组与Ad-GFP组HSC的α-tubulin 荧光IOD比较差异无统计学意义(P>0.05)。 HSC的γ-tubulin也主要表达于胞浆,并在胞浆中有散在点状聚集,但Ad-shRNA/PTEN组HSC的γ-tubulin点状聚集更明显;与对照组HSC的γ-tubulin荧光IOD (20410.68±1815.53)及Ad-GFP组HSC的γ-tubulin荧光IOD (20137.50±1469.49)比较,Ad-shRNA/PTEN组HSC的γ-tubulin荧光IOD (41310.83±1544.68) 明显升高(P<0.05),而对照组与Ad-GFP组HSC的γ-tubulin荧光IOD比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论: 下调体外活化肝星状细胞的PTEN表达可显著增加其α-微管蛋白及γ-微管蛋白表达,并引起上述微管蛋白在胞浆中的分布发生变化。

关键词: 第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因, 体外活化肝星状细胞, 微管, α-微管蛋白, γ-微管蛋白

Key words: phosphatase and tension homology detected on chromosome ten, activated hepatic stellate cells in vitro, microtubule, α-tubulin, γ-tubulin

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