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ISSN 1000-6834
CN 12-1339/R
创刊于 1985年 (双月刊)
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  • 中国应用生理学杂志
      2021年, 第37卷, 第4期 刊出日期:2021-07-28 上一期    下一期
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    研究论文
    Sox11基因对发育期小鼠大脑皮层神经元迁移的影响
    吕烨, 孙小婉, 张聪, 栾志琳
    中国应用生理学杂志. 2021, 37 (4): 337-342.   DOI: 10.12047/j.cjap.6144.2021.052
    摘要   PDF (1788KB)
    目的: 以小鼠为实验动物研究精神分裂症易感基因Sox11对皮层神经元迁移的影响。方法: 应用实时荧光定量PCR、原位杂交等技术明确发育期 (E14.5, P0, P7, P14) Sox11于大脑皮层的表达模式;应用质粒构建、转染、胚胎电转、免疫荧光染色等技术,对不同时期 (E17.5, P0, P4, P7) 的小鼠分别转染对照shRNA质粒、mSox11 shRNA质粒和mSox11 shRNA干扰恢复后质粒,研究Sox11在神经元放射性迁移中的作用。结果: 与对照组神经元相比,转染mSox11 shRNA的神经元迁移明显延迟。当对照组神经元有一部分已经到达新皮层的表层时,大部分转染mSox11 shRNA的神经元仍停留在新皮层中间区;使用大鼠Sox11基因 (rSox11) 过表达载体对小鼠Sox11基因的干扰进行恢复后,神经元迁移完成后的分布情况与对照基本一致。小鼠Sox11干扰后和干扰恢复后,室管膜下区 (SVZ)、中间区 (IZ) 和皮层板 (CP) 内迁移神经元分布具有显著性差异 (P<0.01)。结论: Sox11可以促进皮层神经元的迁移,提示Sox11在小鼠皮层神经元迁移过程中发挥重要功能。
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    低氧mtDNA3010A/G基因型变异诱导的lncRNA-mRNA共表达网络变化
    陈郁, 龚亮, 罗勇军
    中国应用生理学杂志. 2021, 37 (4): 343-348.   DOI: 10.12047/j.cjap.6076.2021.038
    摘要   PDF (1401KB)
    目的: 分析mtDNA3010A/G变异在急性缺氧条件下的长链非编码RNA(lncRNA)和信使RNA(mRNA)的共表达网络变化,探讨关键lncRNA和mRNA在低氧诱导的基因表达调控中的作用。方法: 筛选线粒体DNA(mtDNA)3010-5178-10400的基因型组合A-C-C和G-C-C,以骨肉瘤细胞经溴化乙锭处理后形成的无线粒体细胞(ρ0206细胞)为供体,构建mtDNA3010A和mtDNA3010G基因型融合细胞。经1%O2处理24 h后,采用lncRNA-mRNA共表达芯片检测两种融合细胞的差异表达lncRNA和mRNA,荧光定量聚合酶链式法验证差异显著的mRNA,运用生物信息学方法构建lncRNA-mRNA共表达网络,预测差异lncRNA的靶基因,并对差异显著的mRNA和预测靶基因进行基因本体(GO)和京都基因与基因组大百科全书(KEGG)预测分析。结果: 经1%O2处理24 h后,与mtDNA3010G融合细胞相比,mtDNA3010A融合细胞表达上调的lncRNA有688个,超过2倍的有21个,表达下调的lncRNA有1098个,超过2倍的有4个;表达上调的mRNA有1151个,超过2倍的有14个,表达下调的mRNA有539个,超过2倍的有3个。结论: mtDNA3010A/G基因型变异在缺氧条件下能够影响lncRNA-mRNA调控网络的变化,差异表达的lncRNA和mRNA可能在低氧诱导的基因表达调控网络中发挥重要作用,有望成为从线粒体角度调控低氧反应的靶点。
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    Notch3对促进胰腺星形细胞活化的基因表达及信号通路的影响
    宋海岩, 周志新, 张玉祥
    中国应用生理学杂志. 2021, 37 (4): 349-353.   DOI: 10.12047/j.cjap.6084.2021.024
    摘要   PDF (1124KB)
    目的: 分离培养小鼠胰腺星形细胞(PSCs),检测Notch3 对促进PSCs活化的基因表达及信号通路的影响。方法: 对小鼠PSCs进行分离培养及传代。采用免疫荧光染色检测活化的小鼠PSCs中α-SMA, fibronectin及collagen I的表达;细胞分组为空白对照组(MOCK组),阴性对照组(转染Notch3 siRNA negative control,NC组),Notch3 siRNA组(转染Notch3 siRNA,N3 siRNA组)及Notch3 siRNA-1组(转染Notch3 siRNA-1,N3 siRNA-1组),提取各组总RNA,测定RNA浓度及纯度后,送至安诺优达基因科技(北京)有限公司进行转录组测序。结果: 免疫荧光结果显示,在活化的PSCs中α-SMA,fibronectin及collagen I都有明显的表达。测序结果分析表明,与NC组相比较,在N3 siRNA组与N3 siRNA-1组,α-SMA基因,collagen I基因,fibronectin基因及CTGF基因均表达下调,与胶原蛋白代谢过程相关的基因表达上调,正向调节胶原生物合成的基因表达下调,而负向调节胶原生物合成的基因表达上调,PCNA基因表达下调;在N3siRNA组与N3siRNA-1组,调节细胞聚集的基因表达下调;在细胞组分部分,细胞外基质的基因表达下调;抑制PSCs中Notch3的表达可对细胞粘附分子信号通路,MAPK信号通路及TGF-β信号通路的组成成员的基因表达产生影响。结论: 抑制Notch3的表达可抑制PSCs的活化,降低细胞增殖能力,降低迁移聚集能力及ECM合成的能力;抑制Notch3的表达可对其他的信号如细胞粘附分子信号通路,MAPK信号通路及TGF-β信号通路产生影响。
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    GPR81激动剂对非酒精性脂肪肝病大鼠胰岛素抵抗的影响
    张瑜, 路青华, 曹海芳, 张生荣, 王虎德
    中国应用生理学杂志. 2021, 37 (4): 354-358.   DOI: 10.12047/j.cjap.6055.2021.033
    摘要   PDF (1971KB)
    目的: 探讨NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)大鼠胰岛素抵抗的影响及乳酸受体G蛋白偶联受体81(GPR81)激动剂的干预作用。方法: 选择清洁级SD雄性大鼠30只,随机分为3组,对照组、NAFLD组、GPR81激动剂组,每组10只。用高脂饮食建立大鼠非酒精性脂肪肝模型;GPR81激动剂组:在非酒精性脂肪肝模型基础上腹腔注射GPR81特异性乳酸激动剂(50 nmol/L),每周1次,其余两组注射等量的生理盐水,共12周。测定肝生化指标、空腹血糖及胰岛素和肝匀浆中炎症因子的含量,观察各组肝组织病理学形态;Western blot检测肝组织中NLRP3、含CARD结构域的凋亡相关斑点蛋白(ASC)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1(caspase-1)、胰岛素受体底物-1(IRS-1)、胰岛素受体底物酪氨酸磷酸化(Tyr465-IRS-1)、胰岛素受体底物丝氨酸磷酸化(Ser636-IRS-1)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的蛋白表达;qRT-PCR法检测肝组织NLRP3、ASC、caspase-1、IRS-1、GLUT4 mRNA表达水平。结果: 与对照组相比,NAFLD组大鼠血清肝生化指标甘油三酯(TG)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)值均显著升高(P<0.05);肝组织病理学形态结果表明,NAFLD组大鼠肝组织可见明显的肝脂肪变性,肝细胞有脂肪滴,存在明显的炎性细胞浸润,且NAFLD组肝组织NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA和蛋白表达及Ser636-IRS-1的蛋白表达均显著升高,且肝组织及血清中白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)的含量升高;而IRS-1、GLUT4 的mRNA和蛋白表达Tyr465-IRS-1的蛋白表达显著降低(P<0.05);与NAFLD组相比,GPR81激动剂组上述指标均得到明显改善。结论: NLRP3信号通路活化介导炎症因子产生促进了NAFLD的发生发展,GPR81激动剂可能成为NAFLD潜在的治疗手段。
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    针刺对大鼠运动性骨骼肌损伤内质网应激的干预作用及机制
    丁海丽, 黄增浩, 任在方, 孙竹昕, 李俊平, 王瑞元
    中国应用生理学杂志. 2021, 37 (4): 359-364.   DOI: 10.12047/j.cjap.6097.2021.044
    摘要   PDF (2005KB)
    目的: 观察针刺对大鼠运动性骨骼肌损伤内质网功能酶SERCA、PDI、内质网应激标志蛋白GRP78和PERK通路的影响,探讨针刺防治运动性骨骼肌损伤的内质网途径作用机制。方法: 8周龄雄性SD大鼠随机分为空白对照组(C组,n=6)、单纯运动组(E组,n=30)、针刺对照组(A组,n=30)和运动针刺组(EA组,n=30)。其中,E组和EA组通过一次离心运动建立运动性骨骼肌损伤模型,EA组在运动后即刻于大鼠小腿跟腱上0.5 cm施以针刺干预,A组在同期施以针刺干预。各组根据运动和针刺干预后不同取材时间点分为0 h/12 h/24 h/48 h/72 h亚组(n=6),在对应时相取比目鱼肌进行指标测试。透射电镜观察肌纤维超微机构;ELISA法测定Ca2+-ATP酶(SERCA)和蛋白二硫键异构酶(PDI)含量;Western blot检测内质网应激标志蛋白GRP78及p-PERK、p-eIF2α表达。结果: 与C组比较,A组指标各时相均无显著差异(P>0.05),E组肌纤维超微结构出现不同损伤,SERCA含量0 h至48 h均显著降低(P<0.05),PDI含量0 h显著升高(P<0.05),GRP78表达0 h至72 h均显著升高(P< 0.05),p-PERK表达0 h至24 h显著升高(P<0.05), p-eIF2α表达与p-PERK一致;与E组对应时相比较,EA组肌纤维超微结构明显改善,SERCA含量48 h和72 h显著升高(P<0.05),PDI含量0 h至72 h均显著升高(P<0.05),GRP78表达0 h至72 h均显著降低(P<0.05),p-PERK和p-eIF2α表达12 h和24 h显著降低(P<0.05)。结论: 针刺可有效改善一次大负荷离心运动后导致的运动性骨骼肌损伤并缓解内质网应激,其机制可能与上调蛋白二硫键异构酶PDI以及抑制内质网应激PERK通路有关。
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    电针对快速衰老小鼠肝脏自噬及脂质代谢的影响
    杨云昊, 庞芳, 黄思琴, 杨之雪, 朱正威, 代攀, 郭啸, 廖冬梅, 唐成林
    中国应用生理学杂志. 2021, 37 (4): 365-370.   DOI: 10.12047/j.cjap.6156.2021.053
    摘要   PDF (1939KB)
    目的: 研究电针对快衰老小鼠(SAMP8)肝脏中自噬相关因子LC3-Ⅱ、Beclin1、Atg7、P62表达的影响,探讨电针改善衰老小鼠肝脏脂质代谢的机制。方法: 30周龄雄性SAMP8小鼠随机分为模型组、药物组、电针组,每组7只,以同周龄抗快速老化SAMR1小鼠7只作为对照组。对照组和模型组动物常规饲养4周,不进行任何干预;药物组采用雷帕霉素按(10 mg·kg-1·d-1)腹腔注射干预(1次/日,连续每周6 d);电针组予双侧“肾俞”“太冲”穴电针治疗(15 min/次,1次/日,连续每周6 d)。检测小鼠的血清脂质代谢情况、肝脏脂质沉积情况、肝脏自噬体的分布、肝脏LC3-Ⅱ、Beclin1、Atg7、P62蛋白表达与mRNA表达的变化。结果: 与对照组比较,模型组小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)显著升高(P<0.01);模型组肝脏脂滴沉积明显,自噬体减少,自噬相关因子LC3-Ⅱ、Beclin1、Atg7蛋白及mRNA表达水平明显下降(P<0.01),P62蛋白及mRNA表达水平明显增高(P<0.01)。与模型组相比,电针组与药物组小鼠血清TG、TC、LDL含量明显降低(P<0.01);肝脏脂滴沉积减轻,自噬体增多,LC3-Ⅱ、Beclin1、Atg7的蛋白及mRNA表达水平均显著升高(P<0.01),P62蛋白及mRNA表达水平显著下降(P<0.01)。电针组肝脏Beclin1、Atg7蛋白及mRNA表达水平均与药物组无明显差异(P>0.05)。结论: 电针能够减轻肝脏脂质代谢紊乱,可能与调节肝脏自噬相关因子LC3-Ⅱ、Beclin1、Atg7、P62的表达变化,从而促进SAMP8小鼠肝脏自噬有关。
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    不同海拔汉族健康人大循环及微循环特征的对比
    何宗钊, 邓莉, 马四清, 李欣慧, 王皓
    中国应用生理学杂志. 2021, 37 (4): 371-375.   DOI: 10.12047/j.cjap.6014.2021.006
    摘要   PDF (1001KB)
    目的: 观察青海不同海拔高度的果洛(4 100 m)和互助(2 600 m)与平原地区上海(4 m)汉族健康人大循环及微循环特征。方法: 将青海果洛28名年龄(45.62±10.15)岁、青海互助27名年龄(47.25±8.43)岁、上海20名年龄(43.12±8.28)岁的三地区汉族健康人分为:果洛组(GL)、互助组(HZ)和上海组(SH);抽取静脉血分别行血常规:红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞压积(HCT)、血小板(PLT)的检测;凝血功能:凝血酶原时间(PT)、国际标准化比值(INR)、纤维蛋白原(Fib)、部分凝血活酶(APTT)、凝血酶时间(TT)的检测,应用连续无创血流动力学监测仪(CNAP)连续测定连续心排量(CO)、每搏输出量(SV)、平均动脉压(MAP)、心率(HR)、脉压差变异率(PPV)、血管外周阻力指数(SVRI),应用脉氧监测仪测得指脉氧(SPO2),用旁流暗视野成像(SDF)监测技术观察舌下微循环指标:总血管密度(TVD)、灌注血管密度(PVD)、灌注血管比例(PPV)、微血管流动指数(MFI)。结果: 与上海组比较,互助组和果洛组的RBC、HGB明显升高(P<0.05),而PLT明显降低(P<0.05);互助组的PT、Fib、APTT、TT、CO、HR、SV、MAP、SPO2均明显降低(P<0.05),而TVD、PVD、PPV、MFI均明显升高(P<0.05);果洛组的HCT、 Fib、CO、SV、PPV、MAP、TVD、PVD均明显升高(P<0.05),而PT、INR、TT、SPO2均明显降低(P< 0.05)。与互助组比较,果洛在组的RBC、HGB、HCT、 Fib、APTT均明显升高(P<0.05);而SPO2、TVD、PVD、INR、TT均明显降低(P<0.05)。结论: 不同海拔地区的健康人微循环具有较明显的差异,高海拔地区健康人群微循环密度较平原地区明显增加,特别是在中度海拔地区更为明显,其特殊的生理意义,对救治高原地区感染性休克及慢性高原病有指导意义。
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    研究简报
    RNA干扰下调PTEN表达对体外活化肝星状细胞α-微管蛋白及γ-微管蛋白表达的影响
    郝礼森, 季景秀, 蒋美钰, 张明婷, 张晓岚, 展宗媛, 杨小师, 陈盼盼
    中国应用生理学杂志. 2021, 37 (4): 376-379.   DOI: 10.12047/j.cjap.6022.2021.009
    摘要   PDF (1698KB)
    目的: 探讨RNA干扰下调第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)表达对体外活化肝星状细胞 (HSC) α-微管蛋白(α-tubulin)及γ-微管蛋白(γ-tubulin)表达的影响。方法: 2017年9月至2018年3月,以腺病毒为载体将靶向PTEN的RNA干扰序列—短发夹RNA (shRNA)转染体外培养的活化大鼠肝星状细胞系HSC-T6,实验分为3组:对照组(Control组, 以DMEM代替腺病毒液进行腺病毒转染)、Ad-GFP组(以对照空病毒Ad-GFP转染体外活化HSC)、 Ad-shRNA/PTEN组(以携带靶向PTEN的shRNA的重组腺病毒Ad-shRNA/PTEN转染体外活化HSC),每组设6个复孔。采用Western blot及实时荧光定量PCR技术检测各组HSC的PTEN蛋白及mRNA表达;免疫荧光法检测各组HSC的α-tubulin及γ-tubulin表达。结果: 与对照组及Ad-GFP组比较,Ad-shRNA/PTEN组HSC的PTEN蛋白及mRNA表达明显降低 (P<0.05)。 HSC的α-tubulin主要表达于细胞浆,对照组和Ad-GFP组HSC的α-tubulin呈丝网状、辐射状均匀分布于细胞核周围,而Ad-shRNA/PTEN 组HSC的α-tubulin向细胞两端末梢逐渐聚集并在细胞两端稍增多;与对照组HSC的α-tubulin荧光积分光密度值(IOD) (40803.00±2006.59)及Ad-GFP组HSC的α-tubulin荧光 IOD (42302.50±2537.93)比较,Ad-shRNA/PTEN组HSC的α-tubulin荧光 IOD (101495.17 ±5005.39)明显升高(P<0.05),而对照组与Ad-GFP组HSC的α-tubulin 荧光IOD比较差异无统计学意义(P>0.05)。 HSC的γ-tubulin也主要表达于胞浆,并在胞浆中有散在点状聚集,但Ad-shRNA/PTEN组HSC的γ-tubulin点状聚集更明显;与对照组HSC的γ-tubulin荧光IOD (20410.68±1815.53)及Ad-GFP组HSC的γ-tubulin荧光IOD (20137.50±1469.49)比较,Ad-shRNA/PTEN组HSC的γ-tubulin荧光IOD (41310.83±1544.68) 明显升高(P<0.05),而对照组与Ad-GFP组HSC的γ-tubulin荧光IOD比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论: 下调体外活化肝星状细胞的PTEN表达可显著增加其α-微管蛋白及γ-微管蛋白表达,并引起上述微管蛋白在胞浆中的分布发生变化。
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    研究论文
    蒙药绍沙-7味丸防治大鼠心肌缺血/再灌注损伤的作用
    杨向君, 王羽, E.巴雅日玛, 赵明, S.贺希格扎日嘎拉
    中国应用生理学杂志. 2021, 37 (4): 380-384.   DOI: 10.12047/j.cjap.6114.2021.029
    摘要   PDF (1712KB)
    目的: 探讨蒙药绍沙-7味丸对心肌缺血/再灌注损伤大鼠的防治作用及机制。方法: 60只大鼠随机分成6组:假手术组、模型组、蒙药绍沙-7味丸低、中、高剂量组以及阳性药对照组,每组10只;蒙药绍沙-7味丸低、中、高剂量组分别灌胃0.4 g/kg、0.8 g/kg、1.6 g/kg蒙药绍沙-7味丸,阳性药对照组灌胃0.3 g/kg复方丹参片,假手术组和模型组灌胃2 ml/100 g蒸馏水,均连续灌胃15 d,1次/日;15 d后,模型组及治疗组大鼠开胸结扎冠状动脉30 min后,解开结扎线行再灌注120 min后关闭胸腔处理;6组大鼠术后行心电图检查后处死大鼠取心脏行HE染色、TTC染色,观察梗死面积及病理变化。ELISA法检测血清中cTnI、CK-MB、 LDH、MDA、SOD、GSH-PX及TNF-α、IL-18、IL-6、IL-1β的水平,免疫组化法检测心肌组织NF-кB水平。结果: 与假手术组相比,心肌缺血/再灌注损伤大鼠心肌梗死面积增大,同时血清中cTnI、CK-MB、 LDH、MDA、GSH-PX及TNF-α、IL-18、IL-6、IL-1β的含量明显增加(P<0.01),SOD的含量则明显降低(P<0.01),心脏组织中的NF-кB水平增加;与心肌缺血/再灌注损伤大鼠相较,蒙药绍沙-7味丸改善大鼠心律失常现象及病理变化,减少梗死面积;血清中cTnI、CK-MB、 LDH、MDA、GSH-PX及TNF-α、IL-18、IL-6、IL-1β的含量明显降低(P<0.01),SOD的含量明显增加(P<0.01),心脏组织中的NF-кB水平降低。结论: 蒙药绍沙-7味丸可有效缓解大鼠心肌缺血/再灌注损伤,其作用与氧化应激和凋亡相关。
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    细胞自噬在大鼠缺血/再灌注肺损伤中的调控作用
    郝卯林, 楼国强, 刘秀洁, 钱巍, 王嘉, 周卓琳, 王万铁
    中国应用生理学杂志. 2021, 37 (4): 385-388.   DOI: 10.12047/j.cjap.6061.2021.019
    摘要   PDF (1448KB)
    目的: 探讨细胞自噬在大鼠缺血/再灌注肺损伤中的作用。方法: 随机将40只SD大鼠分为5组(n=8),分别为 ① 假手术组(Sham组):只开胸3.5 h;② 缺血/再灌注组(I/R组):开胸夹闭肺门缺血0.5 h后再灌注3 h;③ 溶剂组(DMSO组):术前1 h腹腔注射DMSO溶液;④自噬激动剂组(Rap组):术前腹腔注射雷帕霉素溶液;⑤自噬抑制剂组(3-MA组):术前1 h腹腔注射3-MA溶液;后三组的其余操作同I/R组。实验结束后处死大鼠,取肺组织,记录并计算肺组织湿/干重比(W/D)、总肺含水量变化(TLW) ,光镜和电镜观察肺组织及细胞形态,计算肺泡损伤率(IAR),Western blot检测自噬相关蛋白的表达情况。结果: 相对于sham组,其余四组肺W/D、TLW、IAR均明显升高,自噬相关蛋白表达明显上升,p-AMPK、Beclin 1、LC3 II 蛋白明显增多,p-mTOR、p62蛋白明显减少(P<0.05或P<0.01),光镜下其余各组肺组织有不同程度的水肿渗出,肺泡结构紊乱,电镜下细胞超微结构损伤加重,部分可见自噬小体;与DMSO组相比,3-MA组肺W/D、TLW、IAR明显下降(P<0.05或P<0.01),自噬相关蛋白表达明显下降,肺间质水肿较轻,细胞渗出较少,细胞超微结构损伤减轻,未见自噬小体。而I/R、DMSO、Rap组的各项指标变化无统计学差异(P>0.05)。结论: 肺缺血/再灌注可诱发细胞自噬增强,从而引起大鼠肺损伤。
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    研究简报
    男性不全饥饿状态下不同饮水量对体成分和某些生理生化功能的影响
    邢瑞, 赵阳鹏, 杜鹏, 穆慧玲, 房龙梅, 白霜, 刘晋, 刘鹏, 王若永, 曾新安
    中国应用生理学杂志. 2021, 37 (4): 389-392.   DOI: 10.12047/j.cjap.6027.2021.030
    摘要   PDF (938KB)
    目的: 探究短期不同饮水量的不全饥饿状态对健康男性体成分和某些生理生化指标的影响。方法: 10名男性分为2组在3 d(72 h)内仅食用能量为1 280 kcal(平均每天420 kcal)的食品,其中限水组仅每日提供500 ml纯净水,不限水组自由饮水。试验期间进行主观症状问卷调查,定时测定体重和体成分,计录每日饮食饮水量及尿量,采用生活作业观察法计算每日能量消耗,试验前后取尿检测尿常规,抽血检测血常规、血生化、尿常规、抗氧化指标。综合评价短期不全饥饿下饮水在机体中的效应。结果: 相较于试验前,主观感觉测试中,2组的饥饿感和疲劳感都随试验时间的推移而加重,但都未出现头晕和头痛症状(P>0.05);2组体重均明显减轻(P<0.05),其中体水分下降明显(P<0.05)、骨质减少(P<0.05)、脂肪和肌肉质量无明显变化(P>0.05);2组血清电解质上升(P<0.05),但谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性无明显变化(P>0.05);2组尿量都明显减少(P<0.05);2组都出现了氧化应激反应,SOD和T-AOC下降(P<0.05)。相较于不限水组,限水组出现明显口渴感(P<0.05),白细胞略微减少(P<0.05),红细胞压积和血小板略微增高(P<0.05),酮体的阳性率升高。结论: 限定饮水量对不全饥饿状态下受试者的白细胞、血小板和尿酮体影响明显,基于本试验,我们认为:每日摄入400 kcal左右能量的不全饥饿状态下,500 ml为可接受的最低饮水量。
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    研究论文
    脂多糖致急性肺血管内皮屏障功能失调小鼠FLI-1蛋白表达的变化及其意义
    徐立聪, 黄婷婷, 郝家乐, 范小芳, 龚永生, 毛孙忠
    中国应用生理学杂志. 2021, 37 (4): 393-396.   DOI: 10.12047/j.cjap.6080.2021.040
    摘要   PDF (1083KB)
    目的: 观察感染性急性肺损伤(ALI)肺血管内皮屏障功能失调小鼠肺组织中弗里德白血病病毒插入位点1(FLI-1)蛋白表达的变化,以探讨FLI-1在感染性ALI肺血管内皮屏障功能失调发生发展中的意义。方法: SPF级雄性ICR小鼠60只,腹腔注射脂多糖(LPS,7.5 mg/kg)复制ALI模型,在给予LPS 0 h、12 h、24 h、48 h后,检测小鼠肺血管内皮屏障通透性和肺湿干重比,ELISA法检测肺泡灌洗液中TNF-α和IL-6含量,Western blot法检测肺组织FLI-1和Src酪氨酸激酶(SRC)蛋白的表达。结果: 与0 h组比较,12 h组、24 h组肺血管内皮屏障通透性分别升高74.3%和162.4%,而48 h组较24 h组降低27.0%(P均<0.05);与0 h组比较,12 h组、24 h组肺湿干重比分别升高50.1%和122.9%,而48 h组较24 h组降低10.7%(P均<0.05);与0 h组比较,12 h、24 h肺泡灌洗液IL-6和TNF-α含量均显著升高,而48 h肺泡灌洗液IL-6和TNF-α含量较24 h分别下降28.3%和21.6%(P均< 0.05);与0 h组比较,12 h组、24 h组肺组织FLI-1蛋白表达水平分别下调20.4%和56.9%,而48 h组较24 h组上调18.2%(P均<0.05);与0 h组比较,12 h组、24 h组肺组织SRC蛋白表达水平分别上调76.8%和176.7%,而48 h组较24 h组下调33.4%(P均<0.05);肺血管内皮屏障通透性与FLI-1蛋白表达水平呈显著负相关(r= -0.8992,P<0.01),而与SRC蛋白表达水平呈显著正相关(r=0.8918,P<0.01),肺组织FLI-1与SRC蛋白表达呈显著负相关(r=-0.8087,P=0.0014)。结论: FLI-1可能参与LPS诱导的急性肺损伤肺血管内皮屏障功能失常过程。
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    党参总皂苷对TNBS诱导的大鼠溃疡性结肠炎的保护作用及其机制
    刘雪枫, 乔婧, 高建德, 陈正君, 刘雄
    中国应用生理学杂志. 2021, 37 (4): 397-401.   DOI: 10.12047/j.cjap.6051.2021.032
    摘要   PDF (1807KB)
    目的: 探讨党参总皂苷(TSC)对大鼠实验性溃疡性结肠炎(UC)的治疗作用及其作用机制。方法: 50只雄性Wistar大鼠随机分为5组:对照组、模型组、柳氮磺胺嘧啶(SASP)阳性对照组(0.3 g/kg)、TSC高剂量组(1.2 g/kg)、TSC低剂量组(0.4 g/kg),用三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇联合灌肠制作大鼠UC模型,给药21 d后,通过观察大鼠症状和体征、疾病活动指数(DAI)、结肠粘膜损伤指数(CMDI)、结肠组织形态;测定结肠组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、炎症因子白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量;检测结肠组织中细胞核内核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达;最终评价TSC的治疗效果。结果: 与对照组比较,模型组大鼠DAI、CMDI评分显著升高,结肠粘膜损伤严重,说明造模成功。与模型组比较,TSC高低剂量组均能显著降低UC大鼠DAI评分、CMDI评分(P<0.05);改善结肠黏膜形态;升高结肠组织中SOD活力,降低MDA含量(P<0.05),抑制结肠组织中IL-6、TNF-α mRNA水平,促进IL-10 mRNA表达(P<0.01);同时降低结肠中NF-κB蛋白表达(P< 0.01),且TSC高剂量组优于低剂量组(P<0.05)。结论: TSC对UC大鼠结肠黏膜损伤具有显著保护作用,以高剂量组为佳;其机制可能与抗脂质过氧化,抑制NF-κB信号通路从而调控炎性因子的释放有关。
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    Mir-335-5p靶向G6PD对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响
    樊小群, 李欢, 朱华雄, 黄健平, 何吕芬
    中国应用生理学杂志. 2021, 37 (4): 402-406.   DOI: 10.12047/j.cjap.6090.2021.041
    摘要   PDF (1097KB)
    目的: 探讨Mir-335-5p通过靶向G6PD对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响。方法: 设置正常结肠细胞组、空白对照组、NC组、miRNA-335-5p mimic组;体外培养结肠上皮细胞(IEC)和人源性结肠癌细胞SW480,并对NC组、miRNA-335-5p mimic组细胞进行转染;采用RT-qPCR检测各组细胞中miR-335-5p及G6PD mRNA表达水平;双荧光素酶报告实验验证Mir-335-5p对G6PD靶向作用;MTT实验检测各组细胞的增殖;流式细胞术检测转染后各组细胞凋亡率;Western blot检测G6PD及凋亡蛋白Bax、Bcl-2、caspase3相对表达水平。结果: 与正常结肠细胞相比,空白对照组、NC组结肠癌细胞SW480细胞中miR-335-5p相对表达水平降低,G6PD mRNA相对表达水平升高(P<0.05);与空白对照组、NC组相比,miR-335-5p mimic组细胞miR-335-5p表达水平明显升高,G6PD mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。与空白对照、NC组相比,miR-335-5p mimic组结肠癌SW480细胞生长活性显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05)。miR-335-5p mimic+WT-G6PD 3′-UTR组的荧光素酶相对活性低于miR-335-5p NC+WT-G6PD 3′-UTR组(P<0.05)。与空白对照组相比,miR-335-5p mimic组细胞中G6PD、Bcl-2蛋白相对表达水平显著降低,Bax、caspase3蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论: Mir-335-5p可能通过靶向G6PD抑制结肠癌细胞增殖、促进凋亡。
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    首发为食管鳞癌的多原发癌患者临床特征及生存分析
    文珍, 张彦秋, 吴蓉, 彭雪梅, 陈彬, 冷爱民
    中国应用生理学杂志. 2021, 37 (4): 407-414.   DOI: 10.12047/j.cjap.6020.2021.008
    摘要   PDF (1409KB)
    目的: 回顾性分析首发癌为食管鳞癌的多原发癌(ESCCFPM)患者的肿瘤临床特点以及生存预后等临床信息,更好的了解食管鳞癌与其他癌症之间的联系,为指导临床诊治提供相应依据。方法: 收集美国国立癌症研究所监测、流行病学和结果数据库(SEER)2004 年1月1日至2016年12月31日ESCCFPM患者临床资料,Kaplan-Meier法进行生存分析并绘制生存曲线图,Log-Rank检验评估各曲线间的差异。生存预后则采用COX比例风险回归模型进行分析。结果: 540例ESCCFPM患者,其中双原发癌491例,三原发癌42例,四原发癌7例。ESCCFPM患者好发于男性,以61~80岁为高发年龄段。食管鳞癌后第二原发癌好发于呼吸系统(36.9%),其次是消化系统(35.2%)及生殖系统(8.9%);本研究病例的1年、3年和5年的总生存率分别为75.9%、50.4%和38.9%。食管鳞癌确诊时年龄、T分期、多原发癌发病间隔分组、多原发癌数目、手术治疗、淋巴结切除、放疗及化疗可影响ESCCFPM患者预后。而年龄、种族、T分期、多原发癌发病间隔分组、多原发癌数目、手术及放疗是影响ESCCFPM患者预后的独立危险因素。结论: 首发癌为食管鳞癌的多原发癌患者,以双原发癌为主,并发呼吸系统及消化系统肿瘤常见,对于年龄在61~80岁的ESCCFPM患者,加强呼吸及消化道肿瘤的随访可能有助于识别多原发癌。手术及放化疗可能提高患者总生存率。
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    紫草素对肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响及其机制
    王瑜, 何施燕, 朱若婷, 柯瑞君, 陈佳玉
    中国应用生理学杂志. 2021, 37 (4): 415-418.   DOI: 10.12047/j.cjap.6137.2021.051
    摘要   PDF (1492KB)
    目的: 探讨紫草素对肝癌SMMC-772细胞的作用及分子机制。方法: SMMC-7721细胞分别经0、5、20、80、320 ng/ml的紫草素作用0 h、24 h、48 h和72 h后,适时采用CCK8法观察该细胞增殖的活性,hoechst染色分析细胞的核型变化,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,Western blot证实细胞内蛋白表达水平的改变,通过小鼠体内实验观察该药的抑瘤作用。结果: 本研究体外实验发现紫草素可显著抑制SMMC-7721细胞的增殖活性并诱导其凋亡(P<0.01),上调基因p53的表达,并抑制AKT、PI3K蛋白的磷酸化,体内实验也证实紫草素可显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长(P<0.01),作用效果随用药剂量和时间的增加而增加。结论: 紫草素可通过影响PI3K/AKT信号通路抑制SMMC-7721细胞的增殖,且诱导其凋亡,具有潜在的抗肝癌作用。
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    不同浓度桦木酸对人胃癌MGC-803细胞凋亡的影响
    樊华, 邵淑丽, 何孟奇, 黄鑫, 张伟伟, 张珍珠
    中国应用生理学杂志. 2021, 37 (4): 419-422.   DOI: 10.12047/j.cjap.6078.2021.039
    摘要   PDF (2034KB)
    目的: 以人胃癌MCG-803细胞为实验材料,探讨不同浓度桦木酸(BA)对人胃癌MGC-803细胞凋亡的影响,为其临床应用提供依据。方法: 将人胃癌MGC-803细胞分成 4 组,每组设置 3 个复孔,对照组为未加入桦木酸的 MGC-803 细胞,3 组实验组分别加入终浓度为10、20、30 μg/ml桦木酸处理细胞48 h后,通过激光共聚焦显微镜观察各组细胞形态变化;检测桦木酸对细胞Caspase-3和Caspase-9活性的影响;利用流式细胞术检测细胞线粒体膜电位变化;qRT-PCR和Western blot检测凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-9Cytochrome C(Cyt c)mRNA及蛋白水平的表达变化。结果: 与对照组比较, 各处理组Caspase-3和Caspase-9活性显著升高(P<0.01),线粒体膜电位显著下降(P<0.01),Caspase-3、Caspase-9和Cyt c mRNA及蛋白表达均显著上调(P<0.01)。结论: 在终浓度为10 ~30 μg/ml浓度范围内,桦木酸通过调节Caspase-3、Caspase-9和Cyt c的表达诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡。
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    颗粒蛋白前体通过抑制IL-6表达减轻哮喘气道炎症
    齐玉红, 孙思, 王玲, 杨静, 吴光英, 黄琪, 胥文春
    中国应用生理学杂志. 2021, 37 (4): 423-428.   DOI: 10.12047/j.cjap.6126.2021.050
    摘要   PDF (1551KB)
    目的: 探究颗粒蛋白前体(PGRN)在过敏性哮喘中的作用及机制。方法: 分别在野生鼠和IL-6 缺陷鼠中设置对照组和哮喘模型组,每组8只。模型组中,在第0日和第7日致敏小鼠(腹腔注射OVA 100 μg),从第14日起连续激发8 d(5%OVA雾化吸入,30 min/d,每日1次),末次激发24 h后取标本;对照组用PBS代替OVA做相同处理。采集支气管肺泡灌洗液(BALF)进行白细胞计数和分类计数;HE染色观察肺组织病理情况;Q-PCR及ELISA检测小鼠肺匀浆、血清和BALF中细胞因子水平。用IL-13刺激A549或BEAS-2B细胞建立体外哮喘炎症模型,每组3个复孔,共4组:PBS处理组、IL-13处理组、IL-13与重组人PGRN蛋白(rhPGRN)共同处理组及p38磷酸化抑制剂(SB203508)处理组。0 min~48 h后收集细胞及上清,用Q-PCR及ELISA检测PGRN和IL-6的表达;Western blot检测p38的磷酸化。结果: 与对照组相比,哮喘组小鼠肺匀浆和BALF中PGRN均显著降低(P< 0.01),血清PGRN有降低的趋势,然而哮喘小鼠BALF中IL-6显著升高(P<0.05)。与野生鼠哮喘组相比,IL-6缺陷鼠哮喘组BALF中白细胞总数降低(P<0.05),中性粒细胞数降低(P<0.05),PGRN显著升高(P<0.05),肺部病理损伤也减轻。体外实验中,IL-13处理组与PBS处理组相比,PGRN显著降低(P<0.05),IL-6显著增高(P< 0.05),p38的磷酸化增加;p38抑制剂处理组比未处理组中IL-6水平降低(P<0.05)。IL-13与rhPGRN共同处理组的IL-6显著低于IL-13处理组(P<0.05),p38的磷酸化降低(P<0.05)。结论: PGRN通过抑制p38磷酸化降低IL-6水平从而减轻哮喘小鼠气道炎症。
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    研究简报
    黄芪甲苷对辐射诱发肾损伤的干预作用及其机制
    刘淑宁, 丁艳平, 徐郁琴, 康洁, 张晋平, 邵宝平
    中国应用生理学杂志. 2021, 37 (4): 429-432.   DOI: 10.12047/j.cjap.6121.2021.047
    摘要   PDF (1344KB)
    目的: 探讨黄芪甲苷(AS-IV) 对辐射诱导的小鼠肾脏损伤的防护作用及其硫氧还蛋白相互作用蛋白 (TXNIP)/NOD 样受体蛋白3 (NLRP3) 通路机制。方法: 将小鼠分为正常对照组(Control)、二甲基亚砜(DMSO)溶剂组、辐射组(IR)、20 mg/kg AS-IV 预防组(IR+AS-20 mg/kg)和40 mg/kg AS-IV 预防组(IR+AS-40 mg/kg),每组各20只。IR+20 mg/kg 和 IR+40 mg/kg 组小鼠每天分别于腹腔注射20 mg/kg、40 mg/kg 的AS-IV;DMSO 组和 IR 组于腹腔注射体重对应的DMSO;Control 组腹腔注射生理盐水。腹腔注射一个月后, IR、IR+20 mg/kg和IR+40 mg/kg 组小鼠接受8 Gy的60Coγ 辐射,总时长7 min,并于辐射完5 d后采集肾脏组织,检测其形态学变化、活性氧(ROS)水平、TXNIP 和 NLRP3蛋白的表达部位及 TXNIP/NLRP3 信号通路相关蛋白的表达情况。结果: 与 DMSO 组相比,辐射组小鼠肾小球和肾小管表现出明显的病理学特征,ROS 水平显著升高,TXNIP 及 NLRP3 蛋白阳性表达于各级肾小管上皮细胞且 TXNIP/NLRP3 信号通路相关蛋白TXNIP、NLRP3、半胱氨酸天冬酶1 (Caspase-1)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-ɑ)的表达显著升高(P<0.01);与 IR 组相比,40 mg/kg 的 AS-IV 预防能明显改善辐射所致的病理反应,显著降低 ROS 水平和 TXNIP、NLRP3 的阳性表达,TXNIP/NLRP3 信号通路相关蛋白的表达显著减少(P<0.01或P<0.05)。结论: 40 mg/kg 的AS-IV给药可显著抑制辐射诱导的肾脏病理变化及 ROS 的产生,并通过抑制TXNIP/NLRP3 信号通路发挥肾脏保护作用。
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    研究论文
    虾青素复合有氧运动对D-半乳糖诱导大鼠肾脏衰老的干预作用及其机制
    牛衍龙, 曹建民, 周绮云, 胡戈, 郭娴, 刘健, 郝敏, 张涛, 周海涛
    中国应用生理学杂志. 2021, 37 (4): 433-438.   DOI: 10.12047/j.cjap.6064.2021.034
    摘要   PDF (2000KB)
    目的: 研究虾青素复合有氧运动对D-半乳糖诱导大鼠肾脏衰老的干预作用及其机制。方法: 60只3月龄SPF级SD大鼠采用两因素两水平2×2析因设计随机分为空白对照组(C组)、急性衰老组(S组)、虾青素+急性衰老组(AS组)、有氧运动+急性衰老组(ES组)、虾青素+有氧运动+急性衰老组(AES组),每组12只。大鼠腹腔注射100 mg/(kg·d) D-半乳糖复制经典急性衰老模型,并分别以20 mg/(kg·d) 虾青素和/或强度为60%最大摄氧量的有氧运动进行干预,实验周期6周。末次训练12 h后取肾脏,光镜/电镜观察肾脏组织形态/超微结构,酶联免疫吸附法检测肾脏组织超氧化物歧化酶(SOD)、γ-谷氨酸半胱氨酸合酶(γ-GCS)活性及丙二醛(MDA)含量,荧光比色法检测肾脏组织脂褐质(LDF)含量,免疫组化法检测肾脏组织核因子E2相关因子2(Nrf2)通路蛋白质表达水平。结果: 与AS、ES组比较:AES组肾脏组织形态/超微结构改善更为显著;LDF含量均显著降低(P<0.01);SOD活性均显著升高(P<0.01);γ-GCS活性显著高于AS组,而与ES组无显著性差异(P>0.05);MDA含量组间无显著性差异(P>0.05);Nrf2、磷酸化核因子E2相关因子2(p-Nrf2)蛋白质表达均显著升高(P<0.05,P<0.01);抗氧化酶血红素氧合酶1(HO-1)蛋白质表达显著高于ES组(P<0.05),而与AS组无显著性差异(P<0.05)。结论: 虾青素复合有氧运动可以延缓肾脏衰老,其作用机制可能为调控Nrf2信号通路相关蛋白质表达及下游Ⅱ相解毒酶和抗氧化酶活性,改善D-半乳糖致衰大鼠肾脏氧化应激。
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    间歇运动对心梗大鼠心肌氧化应激和炎症的影响及其机制
    耿元文, 林琴琴, 王湘怡, 李若明, 田振军
    中国应用生理学杂志. 2021, 37 (4): 439-444.   DOI: 10.12047/j.cjap.6094.2021.043
    摘要   PDF (1296KB)
    目的: 探讨间歇运动激活心肌梗死(MI)大鼠SIRT1-Nox4-ROS通路抑制心脏氧化应激和炎症的作用。方法: 选取雄性SD 大鼠30 只,随机分为假手术对照(C)组,心肌梗死(MI) 组和心梗+间歇运动(ME)组,每组10 只。MI 组采用心脏左冠状动脉前降支(LAD) 结扎法,建立MI 模型。C组大鼠实施假手术,ME 组大鼠在MI 手术后1 周进行4 周跑台运动。第一周为适应性训练(10~15 m/min,30 min/d,共5 d)。正式训练起始训练速度10 m/min,时间为10 min。速度逐渐增至25 m/min,运动7 min后,间歇3 min,其速度为15 m/min,之后依次交替进行,运动总时间为60 min,5 d/周 ×4 周。训练结束后测定各组大鼠心电图变化,开胸摘取心脏。HE染色检测心肌组织结构,紫外分光光度法测定心脏MDA含量和SOD活性,微量酶标法测定心脏LDH活性,RT-qPCR 检测心肌SIRT1 mRNA表达,Western blot 检测心肌SIRT1、Nox4、TNF-α和IL-1β蛋白表达,DHE 法检测心肌活性氧(ROS)水平。结果: 与C组比较,MI组大鼠心肌组织出现代替性纤维化,心脏Nox4蛋白表达显著增加 (P<0.01),MDA含量、LDH活性和ROS水平显著升高(P<0.01),SOD活性显著降低 (P<0.01),TNF-α和IL-1β蛋白表达显著增加 (P<0.01),SIRT1 mRNA和蛋白表达显著降低 (P<0.01)。与MI组比较,ME组大鼠心肌纤维化降低,心脏Nox4蛋白、MDA含量、LDH活性和ROS水平显著降低 (P<0.01),SOD活性显著增强 (P<0.01),TNF-α和IL-1β蛋白表达显著降低 (P<0.01),SIRT1 mRNA和蛋白表达明显增多 (P<0.01)。且发现SIRT1与Nox4及ROS 水平均呈显著负相关(r分别为-0.925和-0.899,P均<0.01)。结论: 间歇运动抑制心梗心脏氧化应激和炎症反应,改善心功能,其机制与SIRT1-Nox4-ROS信号通路激活密切相关。
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    技术方法
    利用膜片钳技术标记脑片神经元的方法
    高洁, 黄燕云, 张雨彤, 杜相欣, 张利娜, 郝娜, 郭霞, 李建国, 张宇
    中国应用生理学杂志. 2021, 37 (4): 445-448.   DOI: 10.12047/j.cjap.6035.2021.031
    摘要   PDF (1151KB)
    目的: 介绍一种利用膜片钳技术标记脑片神经元形态的方法。方法: 利用振动切片机切好实验目标部位的脑片,用含有NeurobiotinTM Tracer的电极内液灌注玻璃微电极,并进行全细胞膜片钳记录;实验结束后将脑片先用4%多聚甲醛固定、漂洗,再用含有Streptavidin-Texas Red和Triton X-100的PB染色,2 h后即可用荧光显微镜观察着色的神经元。结果: 将细胞膜电压钳制在-70 mV,阶跃刺激后神经元表现为逐渐增大的膜电流。电流钳模式记录时,阶跃刺激使神经元去极化,达到阈电位后爆发动作电位。荧光显微镜下可看到胞体和主要突起清晰完整的神经元形态。结论: 本方法适用于在膜片钳实验后观察所记录的神经元的形态特征,操作方便,图像直观清晰。
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  2019-03-15
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