白花蛇舌草多糖提取物对喉癌Hep-2细胞内质网自噬的影响*

doi:10.12047/j.cjap.6096.2021.089

摘要/Abstract

摘要： 目的:探讨白花蛇舌草多糖提取物(HDPE)对喉癌Hep-2细胞内质网自噬的影响。方法:实验分为对照组、HDPE 100、200、400 mg/L组和3-MA(自噬抑制剂)组,噻唑盐比色法(MTT)检测各组细胞培养24 h、48 h、72 h后增殖抑制率;原位末端转移酶标记法(TUNEL)法检测各组培养48 h细胞凋亡情况;单丹黄酰尸胺(MDC)染色观察各组培养48 h细胞自噬体及自噬溶酶体的变化;透射电镜观察培养48 h细胞内质网周围自噬囊泡的产生情况;蛋白印迹法(Western blot)检测各组培养48 h细胞Beclin-1蛋白(Beclin-1)、微管相关轻链蛋白3Ⅰ(LC3Ⅰ)、微管相关轻链蛋白3Ⅱ(LC3Ⅱ)、葡萄糖调节蛋白 78(GRP78)、活化转录因子6(ATF6)及CCAAT 增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达。结果:与对照组比较,HDPE 100、200、400 mg/L组和3-MA组细胞增殖抑制率、凋亡指数AI升高,MDC阳性细胞率量降低,内质网周围自噬囊泡减少,GRP78、ATF6及CHOP表达及LC3Ⅰ/LC3Ⅱ比值升高,Beclin-1表达降低(P＜0.05);与3-MA组比较,HDPE 400 mg/L组细胞增殖抑制率、凋亡指数AI升高,MDC阳性细胞率、GRP78、ATF6及CHOP表达及LC3Ⅰ/LC3Ⅱ比值升高,Beclin-1表达降低(P＜0.05)。结论:HDPE可能通过抑制喉癌Hep-2细胞内质网自噬,促进细胞内质网应激凋亡,进而抑制Hep-2细胞增殖能力。

关键词: 白花蛇舌草多糖提取物, Hep-2细胞, 喉癌, 内质网应激, 内质网自噬

Abstract: Objective: To investigate the effects of Hedyotis diffusa polysaccharide extract (HDPE) on endoplasmic reticulum autophagy in laryngeal cancer Hep-2 cells. Methods: The cells were divided into control group, HDPE 100, 200, 400 mg/L group and 3-MA(autophagy inhibitor) group. MTT assay was used to detect the inhibition rate of cell proliferation after 24, 48 and 72 h of culture, and TUNEL was used to detect the apoptosis of cells in each group. The changes of autophages and autophagic lysosomes were observed by MDC staining, and the formation of autophagic vesicles around endoplasmic reticulum was observed by transmission electron microscopy. Western blot was used to detect the expressions of Beclin-1, microtubule-associated light chain protein 3I (LC3I), microtubule-associated light chain protein 3II (LC3II), glucose regulatory protein 78 (GRP78), activated transcription factor 6 (ATF6) and CCAAT enhancer binding protein homologous protein (CHOP) in each group. Results: Compared with the control group, the inhibition rate of cell proliferation and apoptotic index AI in HDPE 100, 200, 400 mg/L group and blocker group were increased, the positive rate of MDC was decreased, and the autophagic vesicles around endoplasmic reticulum were reduced. The expression levels of GRP78, ATF6 and CHOP and the ratio of LC3I/LC3II were increased, and the expression of Beclin-1 was decreased (P＜0.05). Compared with 3-MA group, the inhibition rate of cell proliferation and apoptotic index AI in HDPE 400 mg/L group were increased, the positive rate of MDC was decreased, the expressions of GRP78, ATF6 and CHOP and LC3I/LC3II ratio were increased, and the expression of Beclin-1 was decreased (P＜0.05). Conclusion: HDPE may inhibit the proliferation of Hep-2 cells by inhibiting endoplasmic reticulum autophagy and promoting the apoptosis of endoplasmic reticulum stress in laryngeal cancer Hep-2 cells.

Key words: hedyotis diffusa polysaccharide extract, Hep-2 cells, laryngeal cancer, endoplasmic reticulum stress, endoplasmic reticulum autophagy

中图分类号:

R739.65

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白花蛇舌草多糖提取物对喉癌Hep-2细胞内质网自噬的影响^*

Effects of Hedyotis diffusa polysaccharide extract on autophagy of endoplasmic reticulum in laryngeal cancer Hep-2 cells

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