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ISSN 1000-6834
CN 12-1339/R
创刊于 1985年 (双月刊)
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  • 中国应用生理学杂志
      2020年, 第36卷, 第6期 刊出日期:2020-11-28 上一期    下一期
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    研究论文
    雌激素对老年C57BL/6J小鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡的影响*
    陈龙, 杨玉琪, 冯子奕, 李雪蕊, 韩子伟, 马克涛, 司军强, 李丽
    中国应用生理学杂志. 2020, 36 (6): 529-533.   DOI: 10.12047/j.cjap.6007.2020.112
    摘要   PDF (1111KB)
    目的:观察雌激素对于老年C57BL/6J小鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡的影响,并探讨雌激素对老年性耳聋保护作用的可能机制。方法:将40只C57BL/6J雌鼠分为以下4组(10只/组): 3 m组(3月龄组),12 m组(12月假手术组); 12 m OVX组(12月去卵巢组),在9月龄行双侧卵巢切除术,正常饲养至12月龄;12 m OVX+E2组(雌激素干预组)在9月龄行双侧卵巢切除术,经过1月洗脱期后,给予皮下注射雌激素100 μg/(kg·d),持续2月至12月龄,其余各组小鼠正常喂养。至12 m OVX+E2组小鼠给药结束后,尾静脉采血,酶联免疫吸附( ELISA) 法检测各组小鼠血清雌激素水平;听性脑干反应(ABR)检测各组小鼠听力阈值变化;用2%戊巴比妥钠麻醉小鼠,断颈后取双侧耳蜗,石蜡包埋切片,苏木精-伊红HE染色观察各组小鼠耳蜗螺旋神经节形态学变化;TUNEL 染色观察各组小鼠耳蜗螺旋神经节神经元凋亡情况;取耳蜗螺旋神经节,应用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)检测各组小鼠耳蜗螺旋神经节凋亡蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2 mRNA 表达水平。结果:12 m组与3 m组相比,小鼠听力阈值升高(P<0.01),耳蜗螺旋神经节细胞出现缺失严重及异常凋亡(P<0.01);12 m OVX组小鼠听力阈值高于12 m组(P<0.01),且螺旋神经节细胞缺失加重,细胞凋亡增多(P<0.01),凋亡蛋白 Caspase-3、Bax mRNA水平升高(P< 0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2 mRNA水平降低(P<0.01);外源性给予雌激素12 m OVX+E2组,较12 m OVX组,听力阈值降低(P<0.01),细胞凋亡减少,凋亡蛋白 Caspase-3、Bax mRNA水平降低(P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2 mRNA水平升高(P<0.01)。结论:雌激素可抑制老年C57BL/6J小鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡,从而实现对老年性耳聋的保护作用。
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    即早基因c-fos在THP-1单核巨噬细胞亚型极化中的差异表达*
    陈启文, 吴国栋, 颜治云, 张文成, 张梅
    中国应用生理学杂志. 2020, 36 (6): 534-538.   DOI: 10.12047/j.cjap.5865.2020.113
    摘要   PDF (1383KB)
    目的:探讨即早基因c-fos在THP-1巨噬细胞亚型极化过程中的表达变化。方法:运用PMA刺激诱导THP-1单核细胞极化为巨噬细胞,观察c-fos在单核细胞极化过程中的表达变化;在PMA刺激的基础上,分别运用LPS和IL-4诱导THP-1巨噬细胞向M1及M2亚型极化,实时定量PCR及Western blot技术分析刺激24 h时,细胞亚型标记物CD274、CD86和CD163的表达变化,并动态观察诱导极化过程中,c-fos的表达情况。结果:c-fos在PMA刺激THP-1单核细胞分化为巨噬细胞过程中蛋白和mRNA水平显示上调;LPS诱导THP-1巨噬细胞极化为M1型过程中,c-fos蛋白和mRNA水平表达降低,其特异性标记物在24 h呈现出M1型极化的特点(CD86蛋白表达升高,CD274、CD163蛋白表达降低);IL-4诱导THP-1巨噬细胞极化为M2型过程中,c-fos蛋白和mRNA水平表达升高,其特异性标记物在24 h表现出M2型极化的特点(CD86蛋白表达降低,CD274、CD163蛋白表达升高)。结论:c-fos参与了THP-1单核细胞向巨噬细胞极化的过程,并且可能通过抑制巨噬细胞M1亚型形成,促进巨噬细胞向M2亚型极化的作用参与巨噬细胞的亚型极化及其功能调节中。
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    骶神经电刺激对急性脊髓损伤大鼠肠黏膜免疫屏障功能的影响*
    白春宏, 张文丽, 户士忠
    中国应用生理学杂志. 2020, 36 (6): 539-543.   DOI: 10.12047/j.cjap.6023.2020.114
    摘要   PDF (1495KB)
    目的:观察骶神经根电刺激对急性完全性脊髓损伤大鼠肠黏膜免疫屏障功能的影响。方法:56只Wistar大鼠分为正常组(SG=8只)、脊髓损伤组(CG=24只)和骶神经电刺激组(EG=24只)。CG、EG (分别设24、48和72 h 组,8只/组)。CG、EG大鼠均于全麻下用Fehlings法98 g动脉瘤夹横行钳夹行脊髓损伤并植入骶神经刺激电于右侧骶3神经孔。CG不进行干预,EG行骶神经电刺激。刺激参数:电压4 V,波宽210 μs,频率15 Hz,刺激10 s,间歇20 s。每次持续10 min,间歇10 min,共2 h。早8:00-10:00,晚6:00-8:00两次。分组采集标本,进行HE染色光镜、透射电镜组织学观察、Western blot 方法检测组织锌指蛋白A20、NOD2和CD68蛋白表达量。结果:① 肠道形态学观察:光镜和电镜观察脊髓损伤后黏膜结构破坏明显,肠腔细菌和杂质进入破损的肠黏膜上皮细胞、M细胞和经细胞间连接缝隙进入黏膜下,引起局部炎症反应;经电刺激后均有了很大程度改善。② 锌指蛋白A20:与SG相比,CG各小组A20表达均明显降低(P<0.01);与SG、CG相比,EG各小组A20的表达均明显升高(P<0.01)。NOD2:与SG比,CG各组NOD2的表达明显升高(24 h、72 h P<0.05;48 h P<0.01);与CG比,EG 48 h、72 h NOD2的表达明显降低( 48 h P<0.01,72 h P<0.05);与SG相比,EG各组NOD2表达均无统计学意义。CD68:与SG、EG比,CG各组CD68的表达均明显升高(P<0.01);与SG相比,EG24 h、48 h组NOD2表达明显升高(P<0.01),72 h组无统计学意义。结论:电刺激S3神经根能保护肠黏膜机械屏障,减少病原体入侵,改善肠黏膜免疫屏障功能。
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    世居高原健康成人逐级递增负荷运动测试心率拐点与乳酸恢复能力、肺功能的相关性*
    孔海军, 周霞, 李新龙, 王振杰
    中国应用生理学杂志. 2020, 36 (6): 544-551.   DOI: 10.12047/j.cjap.6001.2020.115
    摘要   PDF (1069KB)
    目的:探讨世居3 200 m高原环境下20~40岁健康人群逐级递增负荷运动测试(Conconi)心率拐点(HRDP)与乳酸恢复能力、肺功能关联性。方法:以225名世居3 200 m高原的20~40岁健康人群为研究对象,按照年龄区分为20~25岁组(男26,女25)、26~30岁组(男32,女28)、31~35岁组(男29,女33)及36~40岁组(男22,女30),通过改良后Conconi测试前、测试中及测试后恢复期心率、血乳酸变化规律评价机体HRDP强度、心率恢复能力及血乳酸恢复能力。结果:①受试者心率水平随运动强度提高呈上升趋势,且运动后恢复期心率水平呈现下降趋势,世居高原男性Conconi测试中心率水平显著低于女性(P<0.05);同年龄阶段下,男性HRDP出现较晚,女性HRDP出现较早;同性别阶段下,男性组随年龄上升HRDP出现时间提前,女性组该现象不显著;HRDPspeed随年龄上升存在下降趋势。②随年龄上升,受试者血乳酸拐点浓度逐渐降低,但低年龄组与高年龄组间不存在显著差异;男性Conconi测试中血乳酸水平显著低于女性(P<0.05)。③随年龄上升各性别组FVC、MVV、FEV1及FEV1/FVC水平均呈下降趋势,男性组以上各数据均显著高于同年龄段女性组(P<0.05)。④负荷-心率曲线及心率-血乳酸拟合曲线显示,男性组相关系数依次为0.8345、0.8954、0.8680及0.8892;女性组相关系数依次为 0.9318、0.9661、0.9663及0.9599。各性别、年龄组HRDP值均与其MVV水平存在显著关联(P<0.05),除男性组36-40岁受试者外,其余各性别、年龄组肺功能与乳酸消除速率亦存在显著关联(P<0.05)。结论:世居3 200 m高原20~40岁健康人群运动心率反应规律及呼吸系统机能存在年龄及性别差异,HRDP与乳酸恢复能力、肺功能间存在显著关联,上述指标可以作为评估世居高原健康成人有氧运动耐力能力的有效手段。
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    研究简报
    行走模式对人体下肢三维步态、肌电信号的影响*
    梁安迪, 强家豪, 马强, 纽晓丹, 张越, 池爱平
    中国应用生理学杂志. 2020, 36 (6): 551-555.   DOI: 10.12047/j.cjap.6021.2020.116
    摘要   PDF (1039KB)
    目的:揭示人体在主动和被动两种行走模式下的步态特征与下肢主要肌群的肌电信号变化规律。方法:选取12名在校男大学生,通过Greenjog履带式自发力跑台和h/p/cosmos电动跑台建立主动式和被动式行走模型,先后在两种模式下以3种递增速度即慢速(2 km/h)、常速(4 km/h)、和快速(6 km/h)进行一次性步行运动,运用三维运动捕捉分析系统和表面肌电测试仪,分别对每种速度采集2 min的连续三维步态和肌电信号数据。结果:慢速时,被动式行走的支撑相占比显著高于主动式行走(P<0.05),而摆动相占比和膝关节角度变化值则显著低于主动式行走(P<0.05);常速时,被动式行走的膝关节角度变化值和股二头肌积分肌电值显著低于主动式行走(P<0.05);快速时,被动式行走的膝关节、踝关节角度变化值和股二头肌积分肌电值显著低于主动式行走(P<0.01);此外,随着步行速度的增加,被动式行走的胫骨前肌积分肌电值呈现显著增高的趋势(P<0.05)。结论:随着步行速度的增加,人体主动步行时的膝关节活动范围更充分,对主动肌的锻炼作用更明显。
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    研究论文
    急性高原低氧环境对不同情绪状态脑电功率的影响*
    陈甄, 张广波, 周迪, 成祥, 朱玲玲, 范明, 王笃明, 赵永岐
    中国应用生理学杂志. 2020, 36 (6): 556-561.   DOI: 10.12047/j.cjap.5978.2020.117
    摘要   PDF (1277KB)
    目的: 探讨急性高原低氧环境对不同情绪状态脑电功率的影响。方法:本研究为双因素多水平试验设计(氧气环境2个水平×情绪类型4个水平)。通过编写情绪图片诱导12名年龄在20~25岁之间的男性被试产生四类不同情绪:低效价低唤醒(LVLA)、高效价低唤醒(HVLA)、低效价高唤醒(LVHA)、高效价高唤醒(HVHA) ,分别近似于沮丧、轻松、恐惧、快乐四类情绪,并使用Brain Products 32导脑电采集设备采集不同情绪状态下的脑电信号;次日,采用常压低氧舱模拟4 300 m的高原低氧环境,同一批被试在低氧10 h 后使用相同试验范式采集脑电信号。对采集来的脑电信号进行功率谱分析(FFT),同时对额叶(F3\Fz\F4)脑电的五个频段(delta、theta、alpha、beta、gamma)进行两因素重复测量方差分析。结果:功率谱分析发现:急性低氧前后,四类情绪状态下alpha波的全脑分布差异主要集中在额叶、顶叶及部分颞叶;HVLA情绪状态下alpha波全脑分布差异最小。两因素重复测量方差分析结果发现:①delta、beta频段功率受氧气环境影响显著(P<0.05),低氧环境下功率增强。②theta、alpha频段功率指标上,氧气环境和情绪类型交互作用显著(P<0.05),低氧环境下除HVLA情绪状态外,theta、alpha频段功率皆出现了显著增强。③两因素对gamma频段影响都不显著(P>0.05)。结论:在四类情绪状态下,氧气环境的变化对大脑活动的影响差异区域主要集中在额叶、顶叶及部分颞叶;低氧环境对沮丧、恐惧、快乐情绪状态有明显影响,低氧与情绪类型对于theta及alpha频段功率的改变具有协同作用。
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    研究简报
    黄连素对糖尿病大鼠胰岛素抵抗的治疗作用*
    范春芳, 郭一沙, 王嘉欢, 李平, 张海龙
    中国应用生理学杂志. 2020, 36 (6): 561-564.   DOI: 10.12047/j.cjap.6176.2020.118
    摘要   PDF (1033KB)
    目的:探讨黄连素对链脲佐菌素所致糖尿病大鼠胰岛素抵抗的治疗作用。方法:采用链脲佐菌素腹腔注射的方式建立大鼠糖尿病模型,将实验大鼠分为5组:分别为模型组、黄连素低(100 mg/kg)、黄连素中(200 mg/kg)、黄连素高(300 mg/kg)剂量组和阳性对照组(二甲双胍:50 mg/kg),每组10只。另取10只正常大鼠作为正常组。黄连素低、中、高剂量组小鼠每天分别灌胃100、200和300 mg/kg黄连素;对照组每天灌胃二甲双胍50 mg/kg;正常组和模型组每天给予相同体积的生理盐水进行灌胃;1次/天,连续灌胃4周。通过测定大鼠血FBG、果糖胺水平,OGTT实验,胰岛素(FINS)水平,并计算大鼠胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)来评价黄连素对糖尿病大鼠胰岛素抵抗作用。结果:与正常组相比,给药前模型组大鼠静脉血FBG含量显著升高(P<0.05);与模型组比较,给药2周及以后给药4周后阳性对照组、黄连素中剂量组和高剂量组大鼠静脉血FBG含量均显著下降(P<0.05);给药4周后,阳性对照组、黄连素低、中、高剂量组OGTT实验结果显示在不同时间节点的血糖值均显著低于模型组(P< 0.05),阳性对照组、黄连素低、中、高剂量组FBG、果糖胺水平和HOMA-IR指标均低于模型组(P<0.05);而胰岛素水平水平较模型组显著升高(P<0.05)。结论:黄连素可明显降低大鼠的空腹血糖、果糖胺含量,提高胰岛素含量,对链脲佐菌素所致糖尿病大鼠的胰岛素抵抗有明显治疗作用。且一定范围内,黄连素剂量越高,对糖尿病大鼠胰岛素抵抗作用越明显。
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    研究论文
    达格列净对2型糖尿病大鼠肾脏葡萄糖转运蛋白2及葡萄糖转运蛋白4基因表达的影响*
    徐云, 陈雪辉, 白立炜, 尹清风, 冯春瑜, 张清贵
    中国应用生理学杂志. 2020, 36 (6): 565-570.   DOI: 10.12047/j.cjap.6001.2020.119
    摘要   PDF (1170KB)
    目的:探讨达格列净对2型糖尿病大鼠肾脏葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)和葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)基因表达的影响。方法:使用高脂饲料和一次性注射40 mg/kg链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病大鼠模型,造模大鼠以空腹血糖(FBG)含量≥16.7 mmol/L时视为造模成功。造模成功后随机分为模型组(B组,生理盐水)、达格列净低剂量组(C组,0.75 mg/kg)、达格列净中剂量组(D组,1.5 mg/kg)、达格列净高剂量组(E组,3.0 mg/kg),每组6只;另选取6只健康的SD大鼠作为正常对照组(A组,生理盐水)。各组均为灌胃给药,每天1次,连续7周。灌胃给药7周后测定大鼠的体重以及血清FBG、糖化血红蛋白(HbA1c)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)的变化;采用酶联免疫吸附测定血清及肾组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px);采用HE观察肾脏病理学变化;采用Western blot检测肾脏组织中GLUT2、GLUT4蛋白表达;RT-qPCR检测肾脏组织中GLUT2、GLUT4 mRNA相对表达量。结果: 与A组比较,各组大鼠的体重及SOD、GSH-PX水平明显降低(P< 0.05),FBG、HbA1c、BUN、Scr、MDA水平明显升高(P<0.05),肾脏病理损伤严重,肾组织GLUT2、GLUT4 mRNA相对表达量和蛋白表达均明显降低(P均<0.05)。与B组比较,C组、D组和E组大鼠的体重、SOD、GSH-PX水平和肾组织GLUT2、GLUT4 mRNA相对表达量明显升高(P<0.05),FBG、HbA1c、BUN、Scr、MDA水平明显降低(P< 0.05);D组和E组肾脏病理损伤明显减轻,肾组织GLUT2、GLUT4蛋白表达均明显升高(P均<0.05)。结论:达格列净可缓解2型糖尿病模型大鼠的病情,并上调肾脏GLUT2及GLUT4基因的表达。
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    人参归脾丸对脾不统血证大鼠肝损伤的保护作用及其机制*
    王丹, 高峰, 陈慧, 项伟玲, 骆志显, 金丽琴
    中国应用生理学杂志. 2020, 36 (6): 571-575.   DOI: 10.12047/j.cjap.5975.2020.120
    摘要   PDF (1172KB)
    目的:观察人参归脾丸对脾不统血证大鼠的治疗作用及其对肝脏的影响。方法:40只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常对照组(n=10)和实验组(n=30),前42 d,实验组每日游泳30 min,同时饮食一天禁食两天(饮食失节),第43~72日,在游泳力竭加饮食失节的基础上,每日皮下注射低分子肝素钙诱导出血,构建脾不统血证大鼠模型;将成功建立模型的30只大鼠随机分为3组(n=10):模型对照组(MD)、自然复健组(NR)、归脾丸组(GP)。第73~102日,模型组继续施加处理因素(游泳力竭、饮食失节及注射低分子肝素钙溶液),自然复健组和归脾丸组停止施加处理因素,归脾丸组每日灌胃人参归脾丸溶液(0.2 g/ml ,10 ml/(kg·d)),自然复健组灌胃等量生理盐水;第103日后,取血和肝脏,检测血清中各组大鼠丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBil)、总蛋白(TP)水平,检测血中红细胞(RBC)数量、血红蛋白(HGB)含量和红细胞压积(HCT),ELISA试剂盒检测大鼠血清中 IL-6和TNF-α 含量,Western blot检测各组大鼠肝组织细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase3蛋白水平,荧光定量PCR法检测大鼠肝组织细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase3 mRNA表达水平。结果:与正常对照组相比,模型组大鼠血清ALT、AST和TBil水平均显著升高,TP水平明显降低(P< 0.01),血RBC数量、HGB含量和HCT均明显降低(P<0.01),血清IL-6和TNF-α含量均显著升高(P<0.05),肝组织Bcl-2 蛋白及mRNA水平均明显降低、Bax和Caspase3 蛋白及mRNA水平均显著升高(P<0.01);与模型组相比,自然复健组和归脾丸组大鼠血清ALT、AST和TBil水平均明显降低,TP水平显著升高(P<0.01),血RBC数量、HGB含量和HCT均明显升高(P<0.01),血清IL-6和TNF-α含量均明显降低(P<0.05),Bcl-2 蛋白及mRNA水平升高,Bax和Caspase3 蛋白及mRNA 水平降低(P<0.05);与自然复健组相比,归脾丸组血清ALT、AST和TBil均明显降低,TP含量明显升高(P<0.01),血RBC数量明显升高(P<0.05),肝脏Bcl-2蛋白和mRNA水平显著升高(P< 0.05),Caspase3蛋白水平明显降低(P<0.05),Bax mRNA表达显著降低(P<0.05)。结论:人参归脾丸对脾不统血证大鼠肝损伤具有保护作用,其机制可能与其抑制肝脏细胞凋亡、促炎细胞因子释放有关。
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    柔木丹改善小鼠肝纤维化的TGF-β1/Smad4信号通路机制*
    李倩, 闫曙光, 惠毅, 李京涛, 魏海梁, 张红
    中国应用生理学杂志. 2020, 36 (6): 576-581.   DOI: 10.12047/j.cjap.6010.2020.121
    摘要   PDF (1779KB)
    目的:探讨柔木丹(RMD)对改善CCl4诱导的小鼠肝纤维化的TGF-β1/果蝇抗生物皮肤生长因子蛋白家族4号因子(Smad4)信号通路机制。方法:雄性BALB/c小鼠随机分为空白对照组、模型组、RMD治疗组(n=11)。腹腔注射CCl4诱导小鼠肝纤维化模型,模型及RMD治疗组小鼠腹腔注射20 % CCl4(CCl4∶橄榄油=1∶4),注射量为2.5 ml/kg,空白对照组以同样方法注射等量橄榄油,每周2次;第2周起调整模型及RMD治疗组小鼠CCl4腹腔注射量为5 ml/kg(空白对照组注射等量橄榄油),每周2次。成模后,RMD治疗组小鼠使用RMD灌胃给药(6.2 g/(kg·d);空白对照组、模型组使用等量的水灌胃),模型及RMD治疗组小鼠继续腹腔注射20 % CCl4,注射量为1.5 ml/kg(空白对照组注射等量橄榄油),每周1次,持续3 周。采取各组小鼠血清样本检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性;采取各组小鼠肝组织样本使用HE、Masson、原位杂交、免疫组织化学染色、Western blot、Q-PCR等方法进行检测。结果:与正常组相比,CCl4造模5 周后,模型组小鼠肝脏纤维化病理特征明显。与模型组相比,RMD治疗3 周,治疗组小鼠肝组织病理学改变减轻,小鼠的肝脏指数(P<0.01)、血清中的ALT(P< 0.01)、AST(P<0.01)活性、肝组织中羟脯氨酸的含量(P<0.05)均降低;Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ,P<0.01)、Ⅲ型胶原(Collagen Ⅲ,P<0.01)表达减少,胶原沉积减少;肝组织中TGF-β1(P<0.05)和α-SMA(P<0.05)表达均降低;肝组织中Smad4阳性表达区域缩小、表达强度降低。结论:RMD通过抑制TGF-β1/Smad4通路信号转导,减少胶原沉积,进而发挥抗小鼠肝纤维化的作用。
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    鳖甲育肝颗粒对乙醇性肝纤维化大鼠的影响*
    韦凌霞, 丁茂鹏, 王志旺, 刘雪枫, 庞亚蓉, 郭玫
    中国应用生理学杂志. 2020, 36 (6): 582-586.   DOI: 10.12047/j.cjap.6109.2020.122
    摘要   PDF (1620KB)
    目的:探讨鳖甲育肝颗粒对乙醇性肝纤维化大鼠的防治作用。方法:将SD大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、鳖甲育肝颗粒对照组、秋水仙碱组、鳖甲育肝颗粒低剂量组和鳖甲育肝颗粒高剂量组(n=8),采用梯度乙醇灌胃法复制肝纤维化动物模型,即除了空白对照组及鳖甲育肝颗粒对照组灌胃等量纯净水外,其余各组大鼠第1~4周灌胃5 g/(kg·d)乙醇,第5~8周灌胃7 g/(kg·d)乙醇,第9~12周灌胃9 g/(kg·d)乙醇,第13~24周灌胃9.5 g/(kg·d)乙醇,其中乙醇剂量计算采用下列公式:乙醇剂量(g) = 无水乙醇体积(ml)×预配乙醇浓度(%)×0.8(g/ml),同时每天灌胃相应的药物:鳖甲育肝颗粒对照组灌胃鳖甲育肝颗粒5.55 g/kg、秋水仙碱组灌胃秋水仙碱0.1 mg/kg、鳖甲育肝颗粒低剂量组灌胃鳖甲育肝颗粒1.85 g/kg、鳖甲育肝颗粒高剂量组灌胃鳖甲育肝颗粒5.55 g/kg,空白对照组及模型对照组灌胃等量纯净水。实验第169日观测鳖甲育肝颗粒对大鼠肝脏脏器宏观变化、肝组织含水量及其纤维化病理变化、肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、CREB表达水平的影响。结果:1.85、5.55 g/kg鳖甲育肝颗粒能明显改善乙醇性肝纤维化大鼠肝脏脏器宏观变化及肝组织纤维化病理变化,降低肝组织含水量及Hyp的含量,下调α-SMA、CREB表达水平。结论:鳖甲育肝颗粒具有明显的抑制乙醇性肝纤维化的作用,而下调CREB是其抗肝纤维化的作用机制之一。
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    研究简报
    大鼠脑缺血/再灌注过程中血流量和脑组织含水量的变化趋势*
    张冉, 马梦尧, 苏欣宇, 孟想, 姜鲲鹏, 李曙, 洪云
    中国应用生理学杂志. 2020, 36 (6): 586-589.   DOI: 10.12047/j.cjap.6049.2020.123
    摘要   PDF (1195KB)
    目的:研究大鼠脑缺血/再灌注过程中血流量及与脑组织水含量变化的趋势。方法:选取5只成年SD雄性大鼠(n=5),参照改良Zea-Longa线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血/再灌注模型,2 h后拔出线栓。利用PeriCam PSI血流灌注成像系统实时监测大鼠在缺血前及缺血5 min、30 min、1 h、2 h、再灌注5 min、30 min、1 h、2 h、4 h、6 h及24 h的血流灌注量,记录在ROI(感兴趣区)测量的数值。再选取15只成年SD雄性大鼠,分为Control组、缺血2 h、再灌注30 min、4 h及24 h组(n=3)。正常组不做任何处理,实验组按上述线栓法制备MCAO模型。取新鲜脑组织用干湿重法测定其左、右半球的水含量。结果:栓塞时缺血侧血流量逐渐下降,缺血2 h下降最低(P<0.05);再灌注早期血流量恢复较大(P<0.05),30 min时显著下降(P<0.05),4 h明显上升(P<0.05),24 h再次上升(P<0.05)但低于缺血前血流量(P>0.05)。脑组织水含量测量,缺血2 h组和再灌注30 min组与正常组无明显差异(P>0.05);再灌4 h组和再灌24 h组明显增高(P<0.05),且再灌24 h组明显高于再灌4 h组(P<0.05)。结论:大鼠脑缺血/再灌注过程中血流量和脑组织中水含量的变化存在一定的规律,且脑组织中水含量与再灌注过程中血流量的变化有一定关系。
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    研究论文
    36 h完全睡眠剥夺对客体工作记忆相关电位的影响*
    彭子伊, 陈学伟, 张颖, 杨业兵, 张立伟, 邵永聪
    中国应用生理学杂志. 2020, 36 (6): 590-594.   DOI: 10.12047/j.cjap.6030.2020.124
    摘要   PDF (1472KB)
    目的:采用事件相关电位(ERP)技术探讨36 h完全睡眠剥夺对客体工作记忆的影响。方法:本研究采用自身前后对照设计,16名睡眠质量良好的健康大学生(平均年龄为23岁,年龄范围21~28岁)分别在清醒状态下及36 h完全睡眠剥夺后接受2-back客体工作记忆任务,同时采集脑电数据。选用重复测量方差分析的方法比较睡眠剥夺前后与客体工作记忆有关的P2、N2、P3成分的波幅和潜伏期的差异。结果:在36 h完全睡眠剥夺后,与客体工作记忆加工相关的N2波的潜伏期显著延长(P<0.05),波幅减少但未见统计学差异(P>0.05); P2波潜伏期显著延长(P<0.05),波幅未见明显变化(P>0.05)。P3波波幅、潜伏期未见统计学差异(P>0.05)。结论:36 h的完全睡眠剥夺影响了客体工作记忆相关电位,损害了个体的客体工作记忆加工能力。
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    不同压力血流限制结合低强度抗阻训练对大学生下肢肌肉及心肺功能影响*
    芦劼明, 刘善云, 孙鹏, 李乌兰, 连志强
    中国应用生理学杂志. 2020, 36 (6): 595-599.   DOI: 10.12047/j.cjap.6032.2020.125
    摘要   PDF (1027KB)
    目的:探讨不同压力血流限制(BFR)结合低强度抗阻训练对男性大学生下肢肌肉及心肺功能影响。方法:27名健康男性大学生随机分为对照组(C组)、低压组(L组)、高压组(H组),每组9人,受试者大腿近端放置可充气非弹性袖带后分别进行无压力、120 mmHg、180 mmHg,进行20%1次重复最大力量(1RM)强度的负重半蹲训练,比较每周3次,共12周训练前后及各组间股直肌、股中肌肌肉厚度(MTH)、相对伸膝峰值力矩(rM)、峰值功率(P)、相对最大摄氧量(rVO2max)、每搏输出量(SV)、心输出量(CO)、射血分数(EF)等指标的变化。结果:与训练前比较,12周训练后L组和H组股直肌MTH、股中肌MTH、rM、rVO2max、SV、EF均显著提高(P<0.05,P<0.01),且显著高于训练后C组(P<0.05,P<0.01),而L组与H组之间无显著性差异。结论:12周120 mmHg或180 mmHg压力下20%1RM强度BFR训练均可有效提高男性大学生股四头肌肌肉厚度及力量并显著提高心肺功能。
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    miR-203a靶向及其靶基因对乳腺癌淋巴结转移的影响*
    韩利蓉, 宋江勤, 郭飞波, 张栋武
    中国应用生理学杂志. 2020, 36 (6): 600-604.   DOI: 10.12047/j.cjap.6041.2020.126
    摘要   PDF (1029KB)
    目的:探讨miR-203a靶向及其靶基因ATM在乳腺癌组织中的表达及相关性,为乳腺癌的发病机制尤其是淋巴结转移机制提供理论依据。方法:收集30例配对的乳腺癌和癌旁正常组织,对两组标本采用RT-qPCR检测miR-203a及ATM的相对表达量,对miR-203a和ATM进行相关分析,并对其与临床病理特征进行相关分析,比较miR-203a和ATM的表达在淋巴结转移和未转移之间是否有统计学差异。结果:与癌旁正常组织相比,乳腺癌组织中miR-203a的表达显著升高(P<0.01),ATM的表达显著降低(P<0.01),二者呈显著负相关(r=-0.847,P< 0.01);miR-203a和ATM的表达均与淋巴结是否转移与不同临床分期显著相关(P<0.05);miR-203a在淋巴结已转移组中的表达显著低于未转移组(P<0.05),ATM在淋巴结已转移组中的表达显著高于未转移组(P<0.01)。结论:乳腺癌早期miR-203a过表达抑制其靶基因ATM的表达很可能是一种调节肿瘤细胞增殖、转移和侵袭性的保护机制,到中晚期下调miR-203a上调ATM基因,可能参与淋巴结转移。
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    补肾壮骨颗粒对去卵巢大鼠血清GH和IGF-1及其骨组织中受体表达的影响*
    苏海容, 程文姚, 袁秋虹, 欧阳菁, 邓伟民
    中国应用生理学杂志. 2020, 36 (6): 605-610.   DOI: 10.12047/j.cjap.6067.2020.127
    摘要   PDF (2137KB)
    目的:探讨补肾壮骨颗粒对去卵巢大鼠血清生长激素(GH)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及其骨组织中相关受体表达的影响。方法:SD未育雌性大鼠48只(体重273.0±21.3g),分为4组,补肾壮骨颗粒组(BSZG组)给药量为2.5 g/(kg·d),戊酸雌二醇组(E2组)给药量为0.071 mg/(kg·d),假手术组(SHAM组)及去卵巢模型组(OVX组)灌服等量生理盐水。每组各12只,每日干预1次。分别干预3个月、6个月后各取半数,活体采用骨密度仪检测骨密度(BMD)后进行取材,ELISA法检测血清GH和IGF-1,qPCR法检测骨组织GHR及IGF-1R,Image J软件分析垂体GH免疫组化片OD值和阳性细胞计数。结果:①干预3个月后,与SHAM组相比,OVX组腰椎及脊柱BMD均下降(P<0.05),两药物干预组未见明显差异(P>0.05);与OVX组相比,BSZG组两部位BMD及E2组脊柱BMD均有所上升(P<0.05),但两药物干预组比较差异无统计学意义(P>0.05)。干预6个月后,与SHAM组相比,OVX组腰椎及脊柱BMD均有下降(P<0.05),两组药物干预组BMD无明显下降(P>0.05);与OVX组相比,两药物干预组脊柱及股骨BMD均上升(P<0.05),但两药物干预组组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。②两阶段干预后,与OVX组相比,BSZG组血清GH及IGF-1、骨组织GHR及IGF-1R的表达水平均上升(均P<0.05);E2组血清GH和左侧胫骨两受体表达水均上升(P<0.05),但血清IGF-1水平不变(P>0.05)甚至下降(P<0.05)。③两阶段干预后,与SHAM组相比,OVX组光密度值及阳性细胞计数均有下降(P<0.05);与OVX组相比,两药物干预组光密度值和阳性细胞数均有上升(P>0.05)。④Pearson相关分析显示:血清GH、IGF-1浓度及其骨组织受体与BMD呈正相关。血清GH浓度与光密度值及阳性细胞数呈正相关。结论:补肾壮骨颗粒可提高去卵巢骨质疏松大鼠血清GH、IGF-1及其骨组织中受体的表达水平,防止骨量的进一步丢失和增加骨密度。
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    多配体蛋白多糖-1在慢性阻塞性肺疾病大鼠肺上皮间质转化中的作用及机制*
    金艳, 刘文明
    中国应用生理学杂志. 2020, 36 (6): 611-615.   DOI: 10.12047/j.cjap.6001.2020.128
    摘要   PDF (1625KB)
    目的:探讨多配体蛋白多糖-1(syndecan-1)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺上皮间质转化(EMT)中的作用及机制。方法:选择清洁级SD雄性大鼠30只,随机分为假手术组(暴露气管后注射生理盐水,n=10),COPD组(注射1 mg/ml脂多糖后进行烟熏,造模完成后转染100 μl空载病毒,n=10),syndecan-1过表达组(注射1 mg/ml脂多糖后进行烟熏。造模完成后转染100 μl携带大鼠syndecan-1基因的重组腺病毒载体Ad-CMV-GFP-SDC1,n=10),每天1次,连续处理2周。处理结束后检测各组大鼠肺功能并取肺组织;采用HE染色法观察肺组织损伤情况;采用免疫组化检测各组大鼠肺组织syndecan-1、波形蛋白(vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)的蛋白表达;采用Western blot检测转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad2/3和p-Smad2/3蛋白表达水平;采用qRT-PCR法检测各组大鼠肺组织中vimentin、E-cadherin、TGF-β1和Smad2/3 mRNA表达水平。结果:与假手术组相比,COPD组大鼠气道黏膜脱落,管腔狭窄,气道壁较多炎性细胞浸润,肺气肿严重,每分钟呼气量(VE)、最大呼气流量(PEF)和0.3s用力呼气容积(FEV0.3)和肺组织E-cadherin mRNA表达水平均显著降低(P<0.05),而vimentin、TGF-β1、Smad2/3 mRNA表达水平及TGF-β1、Smad2/3和p-Smad2/3的蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。与COPD组相比,syndecan-1过表达组气道黏膜脱落及气道壁炎性细胞浸润数减少,管腔狭窄、肺气肿情况均有所改善,VE、PEF、FEV0.3和肺组织E-cadherin mRNA表达水平显著升高(P<0.05),而vimentin、TGF-β1、Smad2/3 mRNA表达水平及TGF-β1、Smad2/3和p-Smad2/3的蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论:COPD大鼠体内TGF-β/Smad信号通路活化且存在肺EMT;过表达syndecan-1可抑制TGF-β/Smad信号通路,减轻EMT,改善COPD大鼠肺组织损伤。
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    维生素C联合替莫唑胺对胶质瘤细胞的毒性作用及其机制*
    陈明生, 赵海康, 程莹莹, 袁致海, 张越林
    中国应用生理学杂志. 2020, 36 (6): 616-621.   DOI: 10.12047/j.cjap.5958.2020.129
    摘要   PDF (1326KB)
    目的:探讨维生素C(VC)联合替莫唑胺(TMZ)对胶质瘤细胞活力的毒性作用及其机制。方法:在体外条件下培养人胶质瘤细胞BMG-1和SHG44细胞,设对照组(不施加VC与TMZ)、TMZ组(0.2 mmol/L)、VC(0.5 mmol/L)+TMZ(0.2 mmol/L)组,TMZ(0.2 mmol/L TMZ)+U0126(10 μmol/L)组,每组实验重复3次。采用MTT实验检测细胞生存率;流式细胞术和Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡情况; ROS检测试剂盒检测活性氧簇(ROS)水平, Western blot检测与凋亡、自噬及ERK通路相关蛋白的表达。结果:与对照组比较,TMZ组胶质瘤细胞的存活率显著下降(P<0.05)。与TMZ组比较,VC+TMZ组胶质细胞瘤细胞的存活率显著下降(P<0.01),VC+TMZ组中细胞凋亡率显著升高,且Bax、Cleaved caspase-3及Cleaved PARP蛋白表达显著增加,Bcl-2表达显著降低,而ROS水平及细胞自噬率显著降低,LC3-II/LC3-1表达显著降低,p62表达显著增加(P均<0.05)。同时,联用可降低BMG-1和SHG44细胞中的p-ERK1/2相关蛋白的表达水平,且提高细胞凋亡率(P均<0.05)。结论:VC联合TMZ能够增强对胶质瘤细胞的毒性,而这一作用是通过ERK信号通路来促进细胞凋亡并抑制替莫唑胺所介导的自噬作用。
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    LncRNA UNC5B-AS1对肺癌细胞黏附、侵袭及迁移的影响及其机制*
    谭建军, 隆姝孜, 张涛
    中国应用生理学杂志. 2020, 36 (6): 622-627.   DOI: 10.12047/j.cjap.5993.2020.130
    摘要   PDF (1350KB)
    目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)UNC5B-AS1调控miR-218-5p的表达影响肺癌细胞黏附、侵袭和迁移及其作用机制。方法:选取2017年6月至2019年6月在重庆三峡中心医院肿瘤科经手术切除的20例肺癌患者癌组织和对应癌旁组织标本,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肺癌组织和癌旁组织及其支气管上皮细胞HBE和不同肺癌细胞A549、H1437、H1975、H1299和H460中UNC5B-AS1的表达。将UNC5B-AS1 siRNA转染至肺癌A549细胞,采用黏附实验、Transwell侵袭实验及划痕实验检测下调UNC5B-AS1对A549细胞黏附、侵袭和迁移能力的影响;qRT-PCR和双荧光素酶报告基因检测实验鉴定UNC5B-AS1对miR-218-5p的靶向调控关系;Western blot检测上皮间质转化(EMT)相关蛋白表达情况。结果:肺癌组织和细胞中UNC5B-AS1表达显著高于癌旁组织和支气管上皮细胞(P<0.05),UNC5B-AS1在肺癌A549细胞中的表达量最高(P<0.05)。下调UNC5B-AS1的表达能够抑制A549细胞黏附、侵袭和迁移能力(P<0.05)。qRT-PCR和双荧光素酶报告基因检测结果表明UNC5B-AS1能靶向调控miR-218-5p的表达。下调UNC5B-AS1可抑制E-cadherin蛋白表达,促进Vimentin和Twist蛋白表达。结论:lncRNA UNC5B-AS1通过靶向调控miR-218-5p的表达促进肺癌细胞黏附、侵袭和迁移,其作用机制可能与促进EMT的发生有关。
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    桦木酸对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响*
    陈亚楠, 邵淑丽, 何孟奇, 黄鑫, 张伟伟, 张珍珠
    中国应用生理学杂志. 2020, 36 (6): 628-632.   DOI: 10.12047/j.cjap.6036.2020.131
    摘要   PDF (1142KB)
    目的:利用不同浓度的桦木酸对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响。方法:桦木酸设4个不同浓度(0、10、20、30 μg/ml),并采用常规化疗药物5-Fu处理作为阳性对照,以探究其对细胞增殖的影响。采用台盼蓝拒染法和吉姆萨染色法分别检测桦木酸对人胃癌SGC-7901细胞生长抑制率及克隆形成率;EdU法检测SGC-7901的细胞增殖;利用流式细胞术检测细胞周期, 应用qRT-PCR和Western blot分别检测细胞周期蛋白cyclin D1,cyclin B1的mRNA和蛋白表达水平。结果:不同浓度的桦木酸处理人胃癌SGC-7901细胞48 h后,其细胞生长抑制率显著升高(P<0.05),克隆形成率和细胞增殖率均明显降低(P<0.01),且呈剂量和时间依赖性;人胃癌SGC-7901细胞被阻滞在G1/G0期,细胞周期蛋白cyclin D1和cyclin B1的mRNA和蛋白表达量也随桦木酸浓度升高而显著降低(P<0.01)。且与5-Fu对照组相比,桦木酸浓度为20 μg/ml和30 μg/ml时,细胞增殖能力明显降低,细胞周期被抑制,细胞周期蛋白表达量均明显降低(P <0.05)。结论:桦木酸通过下调cyclin B1和cyclin D1基因表达,将人胃癌SGC-7901细胞阻滞在G1/G0期,从而抑制细胞增殖。
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    川楝素对人胃癌细胞MKN-45中CTPS细胞蛇形成的影响及其机制*
    陈雯, 张伟伟, 潘阳, 刘畅, 邵淑丽
    中国应用生理学杂志. 2020, 36 (6): 633-636.   DOI: 10.12047/j.cjap.6026.2020.132
    摘要   PDF (1022KB)
    目的:本研究旨在对川楝素(TSN)与胃癌细胞MKN-45中CTPS细胞蛇形成的联系进行初步探究。方法:以人胃癌细胞MKN-45为实验材料,设置7个处理组分别为:0、20、40、60、80、100、120 nmol/L TSN。每组3次重复,分别作用24 h、48 h、72 h,利用CCK-8法检测川楝素对MKN-45细胞增殖抑制作用,使用免疫荧光检测之后再通过激光共聚焦显微镜观察细胞内CTPS细胞蛇形态,qRT-PCR检测川楝素对MYC基因表达的影响。另外设置2个处理组为1 mmol/L DON和1 mmol/L MPA,每组3次重复,作用6 h然后采用免疫荧光检测细胞蛇形态。结果:免疫荧光结果显示,分别利用1 mmol/L DON和1 mmol/L MPA 处理MKN-45细胞后CTPS形成丝状的细胞蛇结构,意味着该细胞具有形成CTPS细胞蛇的能力;川楝素处理组的细胞增殖率明显低于0 nmol/L TSN组(P< 0.01);免疫荧光结果显示80 nmol/L的川楝素作用72 h时MKN-45细胞中CTPS细胞蛇形成数量最多;qRT-PCR检测结果显示,80 nmol/L川楝素作用24 h细胞内MYC表达明显降低(P<0.05),48 h后细胞内MYC的表达量明显增多(P<0.01)随后表达降低。结论:川楝素可能通过调节MYC的表达影响细胞内细胞蛇的组装。
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    miRNA-191对前列腺癌的增殖、迁移侵袭能力的影响及其机制*
    聂永莉, 汤世敏, 彭芳, 许涛, 毛永荣
    中国应用生理学杂志. 2020, 36 (6): 637-641.   DOI: 10.12047/j.cjap.6031.2020.133
    摘要   PDF (1333KB)
    目的:观察miRNA-191对前列腺癌的增殖、迁移和侵袭能力的影响,并探讨其机制。方法:分别检测4种人前列癌细胞系(PC-3、DU-145、LNCa P、22RU1)及人正常前列腺细胞RWPE-2中miRNA-191的表达水平,并选择前列腺癌细胞系PC-3作为实验对象。将PC-3细胞分为3组:空白对照组(不转染)、miRNA-191 NC组(Inhibitor NC转染PC-3细胞)、miRNA-191 Inhibitor组(miRNA-191 Inhibitor转染PC-3细胞),每组设置3个复孔。采用RT-qPCR法检测PC-3细胞miRNA-191和PLCD1的mRNA表达水平;采用CCK8法检测PC-3细胞增殖水平;采用划痕实验和侵袭实验分别检测PC-3细胞迁移能力和侵袭能力;通过Targetscan靶基因预测网站,筛选PLCD1作为miRNA-191的靶向蛋白,并用双荧光素酶靶标实验验证;采用Western blot法检测PC-3细胞PLCD1的蛋白表达。结果:与RWPE-2细胞相比,人前列癌细胞中miNRA-191的表达水平显著升高(P<0.05),且miRNA-191的表达水平在PC-3中较其他3种细胞系显著上调(P<0.05)。抑制miRNA-191的表达水平后,PLCD1表达水平显著升高,PC-3细胞增殖能力受到抑制,迁移和侵袭能力较空白对照组和miRNA-191 NC组显著降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,PLCD1基因是miRNA-191的靶基因。结论:miRNA-191通过靶向PLCD1促进前列腺癌PC-3细胞的增殖、迁移和侵袭能力。
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    SmacN7诱导乳腺癌细胞MDA-MB-157凋亡的作用及其机制*
    吕紫嫣, 张肖艳, 陈弘, 蒋盼若, 陈佳玉
    中国应用生理学杂志. 2020, 36 (6): 642-647.   DOI: 10.12047/j.cjap.5948.2020.134
    摘要   PDF (1092KB)
    目的:探讨SmacN7对乳腺癌细胞MDA-MB-157凋亡的作用及机制。方法:将0-20 μmol/L的SmacN7应用于乳腺癌细胞MDA-MB-157,用MTS法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期,hoechst33342染色观察细胞核型变化,JC-1染色检测线粒体膜电位,LDH释放实验检测药物细胞毒性,qPCR检测各基因转录水平,并通过抑瘤实验证实该药抑制乳腺癌增殖的作用。结果:应用SmacN7后,乳腺癌细胞MDA-MB-157增殖抑制率和细胞凋亡率均增加(P<0.01),核型发生显著变化,细胞线粒体膜电位降低,LDH释放量增加,并上调TRAIL、DR4、DR5、p53、PARP-1、Bax、Bid、BAK、caspase-3、caspase-8、caspase-9基因的转录水平(P<0.01),下调 Ras、PI3K、AKT、mTOR、Bcl2、Bcl-xL、MCL-1、Survivin、cIAP-1、cIAP-2基因的转录水平(P<0.01)。结论:SmacN7可通过TRAIL介导的死亡受体途径和线粒体介导的内源性凋亡途径诱导乳腺癌细胞MDA-MB-157凋亡,发挥抗乳腺癌的作用。
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    甲状腺素对动脉瘤性蛛网膜下腔出血大鼠脑缺氧诱导因子-1α表达的影响及其机制*
    冉卉, 尹浩, 刘窗溪, 韩国强, 高方友, 谌鸿斌, 付航, 徐晓钟, 黎涛, 马骏
    中国应用生理学杂志. 2020, 36 (6): 648-652.   DOI: 10.12047/j.cjap.5985.2020.135
    摘要   PDF (1150KB)
    目的:探讨甲状腺素(T4)对动脉瘤性蛛网膜下腔出血后大鼠脑缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的调节及其机制。方法:72只雄性成年SD大鼠随机分为以下4组:蛛网膜下腔出血模型组(SAH)(n=18)、蛛网膜下腔出血+甲状腺素组(SAH+T4)(n=18)、蛛网膜下腔出血+溶剂组(SAH+溶剂组)(n=18)、假手术组(n=18)。颈内动脉穿刺法建立蛛网膜下腔出血的模型,术后行颅脑CT平扫,建模后立即开始给药,按3 μg/100 g腹腔注射,每隔24 h一次,连续3 d,SAH+T4组予甲状腺素干预,SAH+溶剂组予等体积溶剂干预,均在建模后72 h处死;各组6只大鼠经多聚甲醛灌注处死后石蜡包埋切片行免疫组化染色检测HIF-1α及p-Akt蛋白、6只用TUNEL法检测凋亡,6只用干湿重法做脑水肿含量检测。结果:建模成功后SAH组及SAH+T4组、SAH+溶剂组大鼠的脑组织肿胀明显,蛛网膜下腔可见暗红色血凝块。SAH组神经行为学评分、脑含水量、凋亡率、HIF-1α蛋白、p-Akt蛋白均较假手术组明显增高(P<0.05);SAH+T4组神经行为学评分、HIF-1α蛋白、p-Akt蛋白均较SAH组明显增高,其脑含水量、凋亡均较SAH组明显减少(P<0.05)。结论:使用T4替代治疗可以上调动脉瘤性蛛网膜下腔出血后大鼠脑HIF-1α蛋白表达水平,可能是通过激活三磷酸肌醇激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路,使凋亡率减小,最终大鼠行为学得以改善,对大鼠脑产生保护作用。
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    研究简报
    帕瑞昔布对骨关节炎大鼠软骨细胞的影响*
    李刚, 籍胤玺, 高毅, 冯彦冰
    中国应用生理学杂志. 2020, 36 (6): 652-655.   DOI: 10.12047/j.cjap.6024.2020.136
    摘要   PDF (1240KB)
    目的:探究帕瑞昔布对骨关节炎大鼠软骨细胞形态、数量及TNF-α/NF-κB信号通路在其中的作用。方法:将所选取的大鼠随机分组,第一组,模型组(MO组):该组大鼠制作骨关节炎大鼠模型;第二组,假手术组(SS组):该组大鼠在骨关节做切口后不做任何处理;第三组,治疗组(TR组):该组大鼠制作骨关节炎模型后给予帕瑞昔布进行治疗,每组5只。通过cck-8法、Western blot法、qRT-PCR法、HE染色法、OARSI评分分别检测三组大鼠软骨细胞增殖情况、TNF-α/NF-κB的蛋白表达、TNF-α/NF-κB mRNA的表达水平、软骨组织病变程度。结果:与SS组大鼠比较,MO组和TR组关节软组织细胞增殖虽然均显著减少(P<0.05),但TR组的增殖显著高于MO组。同样TR组的软骨组织结构好于MO组,OARSI评分显著低于MO组(P<0.05);与SS组大鼠比较, MO组和TR组大鼠TNF-α和NF-κB的蛋白与基因表达水平虽然均显著高于SS组,但TR组的相应蛋白与基因表达水平显著低于MO组(P<0.05)。结论:帕瑞昔布可能通过抑制TNF-α/NF-κB信号通路的表达对骨关节炎大鼠起到治疗作用。
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    研究论文
    小檗碱对大鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用及免疫机制*
    孙科, 罗招亮, 胡琛, 龚廷亮, 唐国华, 吴绍萍
    中国应用生理学杂志. 2020, 36 (6): 656-661.   DOI: 10.12047/j.cjap.6001.2020.137
    摘要   PDF (1552KB)
    目的:探讨小檗碱对大鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用及免疫机制。方法:50只SD大鼠随机分为假手术组(Sham group)、模型组(Model group)、小檗碱低剂量组(BBR-L,25 mg/kg)、小檗碱中剂量组(BBR-M,50 mg/kg)、小檗碱高剂量组(BBR-H,100 mg/kg),每组各10只。采用Longa线栓法建立脑缺血/再灌注大鼠模型,缺血2 h后再灌注24 h处理。于造模成功2 h后灌胃给药,假手术组和模型组组按上述方法同体积给予生理盐水。给药24 h后,测定各组大鼠神经功能缺损程度评分及脑梗死率;采用ELISA法检测抗氧化酶SOD和GSH-Px的活性、细胞因子TNF-α、IFN-β、IL-6和NO的含量;采用流式细胞术检测CD4+、CD8+及CD4+/CD8+血清含量;进一步采用RT-qPCR与Western blot技术检测大鼠脑组织内NF-κB-NLRP3信号轴关键基因及蛋白的表达情况。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损程度、脑梗死率均升高(P<0.05),且血清NO、TNF-α、IFN-β、IL-6含量和脑组织的NF-κB p65、NLRP3、ASC及caspase-1基因与蛋白表达水平均升高(P<0.05),而血清中SOD、GSH-Px活性和CD4+、CD8+及CD4+/CD8+水平下降(P<0.05);与模型组比较,BBR-H、BBR-M、BBR-L组大鼠神经功能缺损程度、脑梗死率均下降(P<0.05),且血清NO、TNF-α、IFN-β、IL-6含量和脑组织的NF-κB p65、NLRP3、ASC及caspase-1基因与蛋白表达水平均降低(P<0.05),而血清中SOD、GSH-Px活性和CD4+、CD8+及CD4+/CD8+水平升高(P<0.05)。结论:小檗碱可通过减轻氧化应激,抑制炎症反应,增强免疫功能,减轻大鼠脑缺血/再灌注损伤,其机制可能与抑制NF-κB-NLRP3信号有关。
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    技术方法
    纳米卟啉金属有机骨架对斑马鱼神经系统发育的作用*
    王亚洁, 袁博, 刘伟, 李玉皓, 苑晓勇
    中国应用生理学杂志. 2020, 36 (6): 662-667.   DOI: 10.12047/j.cjap.6015.2020.138
    摘要   PDF (1769KB)
    目的:研究纳米卟啉金属有机骨架(NPMOF)对斑马鱼幼鱼神经系统发育的作用。方法:斑马鱼胚胎在发育6 h(hpf)后随机分为两组:对照组(n=500)和暴露组(n=500),对照组斑马鱼孵化于E3溶液中,暴露组于100 mg/L的NPMOF-E3溶液中,持续暴露至28、48、72、96或120 hpf。以20条斑马鱼为一批,在28、48、72、96和120 hpf分别提取3批实验组和对照组的总RNA用于RT-PCR;在120 hpf,实验组和对照组分别取20条PTU处理过的斑马鱼用于整体胚胎原位杂交,同样是在120 hpf,每组取150条用于免疫荧光染色,30条用于行为学测试。NPMOF的形状和尺寸用透射电镜测定,其光学特性由紫外分光光度计和荧光光谱仪测定;通过免疫荧光、整体胚胎原位杂交和RT-PCR方法检测各类神经细胞的发育;行为学测试用来监测斑马鱼运动状态的改变。结果:与正常组比较,NPMOF暴露组中神经发育相关基因的表达明显升高(P<0.05),müller细胞和星形胶质细胞的数量明显增加(P<0.05),神经元和少突胶质细胞的分布与形态未显示出差异;行为学测试中,斑马鱼的总运动距离、快速运动时间和运动速度的值显著增加(P<0.05),总静止时间明显降低(P<0.05)。结论:100 mg/L NPMOF溶液的持续暴露对斑马鱼神经系统发育,特别是视网膜中müller细胞和脑中星形胶质细胞的发育有促进作用。
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    高效液相色谱串联质谱法同时检测粪便中三种抗抑郁药物*
    邵一帆, 张安琪, 陈天姣, 李海北, 陈郑珊, 尹静, 杨栋, 师丹阳, 梁永兵, 程春燕, 谭蓉, 孙栋良, 李君文, 金敏
    中国应用生理学杂志. 2020, 36 (6): 668-672.   DOI: 10.12047/j.cjap.6173.2020.139
    摘要   PDF (1173KB)
    目的:建立同时检测粪便中度洛西汀、氟西汀、艾斯西酞普兰三种抗抑郁药物的高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS)方法。方法:样品经正己烷-异丙醇(95:5,v/v)预处理后,以超纯水和乙腈混合液作为流动相进行梯度洗脱,在Agilent ZORBAX SB-C18液相色谱柱(2.1 mm×100 mm,3.5 μm)上分离后用电喷雾串联质谱法检测,内标法定量。结果:粪便样品中度洛西汀、氟西汀、艾斯西酞普兰的加标回收率为61.6%~116.5%,精密度为 2.80%~12.9%(n=5),线性方程相关系数(r)均大于0.995,检出限分别为0.1 μg/g、1 μg/g、0.001 μg/g,定量限分别为0.5 μg/g、2 μg/g、0.005 μg/g,符合高效液相色谱串联质谱的分析要求。结论:该方法能够简单、准确检测出粪便中度洛西汀、氟西汀、艾斯西酞普兰这三种抗抑郁药的含量。
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