利用CRISPRi技术沉默MRP1基因增强A549/DDP细胞对顺铂的敏感性*

doi:10.12047/j.cjap.6257.2022.061

中国应用生理学杂志 ›› 2022, Vol. 38 ›› Issue (4): 322-325.doi: 10.12047/j.cjap.6257.2022.061

利用CRISPRi技术沉默MRP1基因增强A549/DDP细胞对顺铂的敏感性^*

孟令雪¹, 孙新迪¹, 张伟伟^1,2, 郭旭¹, 沈洋¹, 邵淑丽^1,2△

1.齐齐哈尔大学生命科学与农林学院, 齐齐哈尔 161006;
2.抗性基因工程与寒地生物多样性保护黑龙江省重点实验室, 齐齐哈尔 161006

收稿日期:2021-12-23 修回日期:2022-07-05 出版日期:2022-07-28 发布日期:2022-11-23
通讯作者: ^△Tel: 13836267458; E-mail: shshl32@163.com
基金资助:
^*齐齐哈尔大学黑龙江省教育厅基本业务专项重点项目(135109104); 黑龙江省高教强省优势特色学科——玉米“粮头食尾”重点专项(LTSW201737); 黑龙江省省属高等学校基本科研业务费科研项目(植物性食品加工技术特色学科专项YSTSXK201809); 2020年齐齐哈尔大学研究生创新科研项目(YJSCX2020046)

Silencing the MRP1 gene using CRISPRi technology to enhance the sensitivity of A549/DDP cells to cisplatin

MENG Ling-xue, SUN Xin-di, ZHANG Wei-wei, GUO Xu, SHEN Yang, SHAO Shu-li

Received:2021-12-23 Revised:2022-07-05 Online:2022-07-28 Published:2022-11-23

摘要/Abstract

摘要： 目的: 采用CRISPRi技术沉默人肺癌A549/DDP细胞MRP1基因表达,观察细胞对顺铂敏感性的变化。方法: 采用生物信息学软件分析MRP1启动子序列,设计合成3对sgRNA干扰片段,定向克隆到pSPgRNA载体中,构建靶向MRP1的干扰表达载体,分别与dCas9表达载体共转染A549/DDP细胞。实验共分为5组,分别为A549/DDP细胞组,Scrambled组,sgRNA-MRP1-1组,sgRNA-MRP1-2组和sgRNA-MRP1-3组,每组设置3个复孔,处理48 h后进行后续实验。通过qRT-PCR和Western blot检测MRP1 mRNA和蛋白表达水平,MTT法检测细胞对药物的敏感性,激光共聚焦显微镜下观察细胞的形态变化。结果: 成功构建了sgRNA-MRP1-1、sgRNA-MRP1-2和sgRNA-MRP1-3 3种干扰载体,分别与dCas9表达载体共转染A549/DDP细胞后,均能显著降低细胞MRP1基因表达(P<0.01),其中sgRNA-MRP1-2干扰效果最好,MRP1 mRNA水平降低了72%,蛋白水平降低了53%。将sgRNA-MRP1-2转染细胞后,细胞对顺铂的敏感性显著增加,IC₅₀值由74.26±3.71降低至34.29±2.51,细胞形态由梭形变为椭圆形,染色质高度凝聚、边缘化,产生凋亡小体。结论: 成功构建3种靶向MRP1的干扰表达载体,均能有效沉默A549/DDP细胞中MRP1基因表达,可增强细胞对顺铂的敏感性。

关键词: CRISPRi, A549/DDP细胞, 多药耐药相关蛋白1, 顺铂, 细胞培养

Key words: CRISPRi, A549 / DDP cells, MRP1, Cisplatin, cell culture

中图分类号:

孟令雪, 孙新迪, 张伟伟, 郭旭, 沈洋, 邵淑丽. 利用CRISPRi技术沉默MRP1基因增强A549/DDP细胞对顺铂的敏感性^*[J]. 中国应用生理学杂志, 2022, 38(4): 322-325.

MENG Ling-xue, SUN Xin-di, ZHANG Wei-wei, GUO Xu, SHEN Yang, SHAO Shu-li. Silencing the MRP1 gene using CRISPRi technology to enhance the sensitivity of A549/DDP cells to cisplatin[J]. CJAP, 2022, 38(4): 322-325.

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利用CRISPRi技术沉默MRP1基因增强A549/DDP细胞对顺铂的敏感性^*

Silencing the MRP1 gene using CRISPRi technology to enhance the sensitivity of A549/DDP cells to cisplatin

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