大鼠海马神经细胞VDAC1基因shRNA慢病毒表达载体的构建及干扰效果评价*

doi:10.12047/j.cjap.6308.2022.080

中国应用生理学杂志 ›› 2022, Vol. 38 ›› Issue (5): 430-433.doi: 10.12047/j.cjap.6308.2022.080

大鼠海马神经细胞VDAC1基因shRNA慢病毒表达载体的构建及干扰效果评价^*

郑刘晔^1,2, 奚用勇³, 张晗^1,4, 蒋与刚^1△

1.军事科学院军事医学研究院环境医学与作业医学研究所, 天津 300050;
2.蚌埠医学院, 蚌埠 233000;
3.杭州医学院临床学院, 杭州 310000;
4.郑州大学, 郑州 450001

收稿日期:2022-03-17 修回日期:2022-08-15 出版日期:2022-09-28 发布日期:2023-04-23
通讯作者: ^△Tel: 13920770716; E-mail: jyg1967@126.com
基金资助:
^* 国家自然科学基金(81872606)

Construction and evaluation of interference effect of shRNA lentivirus expression vector of VDAC1 gene in rat hippocampal neurons

ZHENG Liu-ye^1,2, XI Yong-yong³, ZHANG Han^1,4, JIANG Yu-gang^1△

Received:2022-03-17 Revised:2022-08-15 Online:2022-09-28 Published:2023-04-23

摘要/Abstract

摘要： 目的: 构建线粒体电压依赖性阴离子通道(VDAC1)短发卡样RNA重组慢病毒(LV)载体,沉默海马神经细胞VDAC1基因表达,观察所构建的慢病毒载体对海马神经细胞的干扰效果。方法: 根据基因库提供的大鼠VDAC1基因的核苷酸序列(序列号为:AB039662.1),设计合成3条LV3-VDAC1-shRNA及1条无义的阴性表达载体;将构建好的慢病毒载体转染到海马神经细胞,按照不同的转染条件对细胞分为空载组、对照(NC)组、病毒组,分别在病毒感染复数(MOI)值在100和10的条件下进行转染;采用荧光定量PCR和Western blot的方法分别检测VDAC1基因在mRNA水平和蛋白水平的表达。结果: 与空载组相比,慢病毒感染组的扩增倍数均大于1,VDAC1基因在mRNA水平与蛋白水平表达均明显升高(P＜0.05);与对照组相比,病毒感染复数(MOI)=10与MOI=100之间没有显著差异(P＞0.05);PCR结果与Western blot结果综合来看,VDAC1转录水平表达越高,蛋白水平表达越低,呈现反向关联的状态。 结论: 三种慢病毒对海马神经细胞都有干扰效果,VDAC1基因的mRNA表达和蛋白表达是一种反向关联的状态。

关键词: VDAC1, 慢病毒, 转染, 海马神经细胞, 大鼠

Key words: VDAC1, lentivirus, transfection, hippocampus neuron, rats

中图分类号:

R365

郑刘晔, 奚用勇, 张晗, 蒋与刚. 大鼠海马神经细胞VDAC1基因shRNA慢病毒表达载体的构建及干扰效果评价^*[J]. 中国应用生理学杂志, 2022, 38(5): 430-433.

ZHENG Liu-ye, XI Yong-yong, ZHANG Han, JIANG Yu-gang. Construction and evaluation of interference effect of shRNA lentivirus expression vector of VDAC1 gene in rat hippocampal neurons[J]. CJAP, 2022, 38(5): 430-433.

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